Langendorff Retrograd Kalp Perfüzyonu: İzole Fare Kalbini Perfüze Etmek İçin Ex Vivo Bir Teknik

Başlamak için, anestezi uygulanmış bir fareyi bir diseksiyon tahtası üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Göğüs boşluğuna erişmek ve kalbi ortaya çıkarmak için bir kesi yapın. Aortu ve dallarını bulun - sol ortak karotis arter ve brakiyosefalik arter. Kalbi izole etmek için bu arterleri kesin.

Hemen, eksize edilen kalbi, besin açısından zengin oksijenli bir tampon çözeltisi içeren bir Petri kabına daldırın. Aynı zamanda, ucu çıkan aorta ulaşacak şekilde kalbe bir kanül yerleştirin. Kanülü bağlamak için bir dikiş kullanın. Kanülü oksijenli perfüzyon çözeltisi içeren bir şırıngaya bağlayın.

Perfüzyon solüsyonunu kalbe enjekte edin. Bu adım, kanın koroner arterlerden ayrılmasına ve pulmoner venlerden dışarı çıkmasına izin verir. Ardından, kanüllü kalbi Langendorff cihazına bağlayın. Sabit bir akış hızında perfüzyon yapmak için peristaltik pompa kullanın.

Bu koşullar altında, tampon kalbe perfüze olur. Bu, aort kapaklarını kapatan ve tamponun koroner arterler boyunca hareket etmesine neden olan kanülasyon basıncı oluşturur. Sonunda, tampon kalp kaslarını retrograd olarak perfüze eder ve daha sonra pulmoner damarlardan geçer. Başarılı bir şekilde perfüze edilmiş bir kalp artık daha sonraki sonraki uygulamalar için hazırdır.

8 ila 10 haftalık bir erkek C57BL / 6 fareye ötenazi yaptıktan sonra, ksifoidin cildini kaldırmak için doku forseps kullanın. Ardından, doku makası kullanarak deriden küçük bir yanal kesi yapın. Cilt ve fasya arasında künt bir diseksiyon yapın. Cilt kesisini her iki tarafta V şeklinde koltuk altına doğru uzatın ve kesiye göğüs kafesi boyunca devam edin.

Daha sonra, doku forsepsleri kullanarak, sternumu kelepçeleyin ve kalbi ve akciğerleri tamamen ortaya çıkarmak için göğüs kafesini yukarı doğru kaydırın. Kavisli forseps kullanarak perikardları soyun. Timus bezi büyük damarları kaplıyorsa, timus bezini her iki tarafa doğru yırtmak için iki kavisli forseps kullanın. Ardından, aort ve dal arterleri Y şeklinde bir kan damarı olarak görünene kadar kalbin tabanını nazikçe kuyruğa doğru çekin.

Sol ortak karotis arterdeki aortu kesin. Ardından brakiyosefalik arteri kesin. Kalbi eksize edin ve kalan kanı yıkamak ve dışarı pompalamak için hemen Tyrode solüsyonu içeren bir Petri kabına daldırın. Ardından, kalbi çözelti 1'i içeren başka bir Petri kabına aktarın.

Stereomikroskop altında, ince iris makası kullanarak, fazla dokuyu kesin. Şırıngadaki hava kabarcıklarını dışarı atın. Daha sonra, iki düz bağlama forseps yardımıyla, tüm kanülasyon işleminin sıvı yüzey altında yapılmasına dikkat ederek retrograd aort kanülasyonu gerçekleştirin. Kanülasyon derinliğini, kanül ucu çıkan aortta olacak şekilde ayarlayın ve aort kapaklarına nüfuz etmemeye dikkat edin.

Daha sonra düğüm öncesi 3-0 dikiş ile aortu kanül çentiğine bağlayın. Kalan kanı temizlemek için şırıngadan çözelti 1'i nazikçe enjekte edin. Ardından, kalbe herhangi bir hava kabarcığı sokmamaya dikkat ederek kanüllü kalbi Langendorff cihazına bağlayın. Kanüllü kalbi Langendorff cihazına bağladıktan sonra, kalbi solüsyon 1 ile yaklaşık 2 dakika perfüze edin.