JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 4:51 dk. • July 8th, 2025
Kalbin aort kapağı, yoğun hücre dışı matris boyunca dağıtılan iç kapak, interstisyel hücreler veya VIC'lerden ve üstteki kapak endotel hücreleri veya VEC'lerden oluşan üç yapraklı bir yapıdır.
VIC'leri izole etmek için önce sırtüstü pozisyonda ötenazi yapılmış bir fare hazırlayın. Orta hat karın ve göğüs kesisinden kalbi açığa çıkarın. Sol atriyum ve ventrikül arasında küçük bir çentik yapın ve ardından kanı boşaltmak için salin perfüzyonu uygulayın. Çıkan aortu aort arkı hizasında kesin ve kalbi çıkarın.
'U şeklindeki' aort kapak broşürlerini ortaya çıkarmak için kalbin kalan kısmını uzunlamasına incelemeden önce ventriküllerin distal üçte ikisini kesin ve atın. Yaprakçıkları kesin ve kanı çıkarmak için soğutulmuş tamponla durulayın.
Daha sonra, broşürleri düşük konsantrasyonlu kollajenaz çözeltisi ile muamele edin ve inkübe edin. Düşük konsantrasyonlarda, proteolitik bir enzim olan kollajenaz, hücre dışı matrisi sadece kısmen parçalayarak yüzey VEC'lerini broşürlerden çıkarır.
Enzim içeren süpernatanı santrifüjleyin ve tamponla değiştirin, yeniden süspanse edilmiş peleti bir Petri kabına aktarın. Broşürleri toplayın ve ikinci sindirim için yüksek konsantrasyonlu kollajenaz çözelt
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin