Prenatal Fare Embriyolarının Alınması: Hamile Fareden Embriyo Toplama Prosedürü

Fare embriyoları, erken memeli embriyogenezini incelemek için model sistemler olarak kullanılır. Embriyonik gelişimin istenen aşamasında perinatal fare embriyolarını almak için, sırtüstü pozisyonda ötenazi yapılmış bir hamile fare ile başlayın.

Daha sonra, karın bölgesini sterilize edin ve altta yatan uterus boynuzlarını ortaya çıkarmak için karın duvarında enine bir kesi yapın. Rahim boynuzları, bir dizi embriyo içeren uzun boru şeklindeki yapılardır. Şimdi, rahim boynuzlarını çevre dokudan çıkararak karından dikkatlice ayırın.

Hasat edilen rahim boynuzlarını tampon içeren bir kaba aktarın. Doku kalıntılarını ve kanı temizlemek için rahim boynuzlarını durulayın. Ayrıca, her bir embriyoyu ayırmak için uterus boynuzları boyunca implantasyon bölgeleri arasında kesinti. Embriyo kaynaklı plasental disk ile birlikte maternal plasental tabaka olan desidua'yı çıkarın.

Daha sonra, embriyoyu çevreleyen ve ona besin sağlayan küçük ekstraembriyonik membranöz yapıyı çıkarın - yumurta sarısı kesesi . Son olarak, fare embriyosunu serbest bırakmak için embriyoyu çevreleyen ve koruyan sıvı dolu bir keseden oluşan en içteki ekstraembriyonik zar olan amniyotik zarı çıkarın.

Kurtarılan perinatal embriyolar, erken memeli gelişimini incelemek için kullanılabilir.

Diseksiyon makaslarını ve forsepsleri %70 etanol ile temizleyin. E18.5 veya E19.5'te perinatal embriyoları toplamak için önce hamile fareleri karbondioksit inhalasyonu kullanarak ötenazi yapın. Ardından, NIH yönergelerine göre servikal çıkık yapın.

Daha sonra, hayvanın ventral karın yüzeyine% 70 etanol püskürtün. Daha sonra steril diseksiyon makası ve forseps kullanarak karın boşluğunu açın. Tüm uterusu kaldırın ve uterus boynuzlarının uçlarında vücuttan ayırın. Ardından, tüm uterusu bir Petri kabında 1x PBS ile durulayın.

Uterusu diseksiyon makası ile segmental olarak kesin ve yumurta sarısı keselerindeki embriyoları ortaya çıkarmak için plasental desiduayı diseksiyon forsepsleri ile çıkarın. Önce yumurta sarısı kesesini çıkarın ve ardından perinatal embriyoları serbest bırakmak için amniyotik zarı diseksiyon forsepsleri ile çıkarın.