JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 2:53 dk. • July 8th, 2025
Yenidoğan fare yumurtalıklarını izole etmek için, cerrahi bir platformda sırtüstü pozisyonda ötenazi yapılmış bir yenidoğan fare yavrusu ile başlayın. Karın boşluğunu ortaya çıkarmak için cilt ve vücut duvarı üzerinde uzun bir cerrahi kesi yapın. Ardından, altta yatan uterus boynuzlarını ortaya çıkarmak için bağırsakları nazikçe değiştirin.
Rahim boynuzları, rahim ağzında birleşen ve mesaneden böbreklere doğru uzanan iki uzun boru şeklindeki yapıdır. Yumurtalıkları tanımlayın - küçük, oval şekilli bezler - rahim boynuzlarının ucundaki böbreklerin hemen altında bulunur ve yumurta kanalları aracılığıyla bağlanır.
Şimdi, yumurtalıkları serbest bırakmak için her uterus boynuzundan yumurtalığın bağlantı bölgesini kesin. Eksize edilen yumurtalıkları, doku içindeki oositlerin canlılığını korumak için hemen uygun önceden ısıtılmış ortam içeren steril bir kültür kabına aktarın. Kültür çanağını bir diseksiyon mikroskobunun ısıtılmış aşamasına yerleştirin.
Bir iğne kullanarak, yumurtalık bursasını, yumurtalığı çevreleyen bir bağ dokusu kesesini ve yumurta kanalının kalıntılarını dikkatlice çıkarın. Son olarak, yumurtalıkları ortam içeren çok kuyulu bir plakaya aktarın. İzole edilmiş yumurtalıklar, aşağı akış işlemi için kullanılabilir.
Her steril cam embriyo kabına 1 mililitre diseksiyon ortamı aktararak başlayın. Doğum sonrası 0 ila 5 günlük yavruları itlaf ettikten sonra, karın duvarını kaplayan deriyi ince forseps ile kavrayın ve cildi ve vücut duvarını kesin. Karnı açığa çıkaracak şekilde bu büyük kesiyi çekin. Mesane genellikle bu aşamada tıkanır ve diseksiyonu kolaylaştırmak için delinebilir.
Saatçi forsepslerini kullanarak bağırsakları bir kenara çekin. Daha sonra, her iki tarafta da mesaneden böbreğe kadar uterus boynuzlarını takip edin. Yumurtalık, rahmin üst kısmında böbreğin hemen altında bulunan bulut benzeri bir yapıdır. Yumurtalığı nazikçe kavrayın ve makas kullanarak rahimden serbest bırakın. Her iki yumurtalığı da inceledikten sonra, ılık diseksiyon ortamı ile doldurulmuş bulaşıklara aktarın.
Yumurtalıkları incelemek için 37 santigrat derecede ısıtılmış bir sahneye sahip bir diseksiyon mikroskobu kullanın. İnsülin iğneleri kullanarak, bursa kesesini ve fallop tüpü de dahil olmak üzere fazla materyali sadece yumurtalık kalana kadar kesin. Daha sonra, her bir yumurtalığı kavisli bir pipet kullanarak hazırlanmış bir plakanın kuyucuğuna aktarın.