JoVE Encyclopedia of Experiments
Biyoloji
0 görüntüleme • 3:48 dk • July 8th, 2025
İnsüline bağımlı diyabetin bir fare modelinde, pankreas adacıkları terapötik amaçlar için hepatik portal ven yoluyla enjekte edilir. Adacık kümesi içindeki beta hücreleri, kan şekeri seviyelerini düzenleyen bir hormon olan insülini üretir.
İntraportal enjeksiyon basit ve etkili bir tekniktir, ancak ameliyat sonrası kanama genellikle model hayvanın ölümüne yol açar. Bu komplikasyonu önlemek için, sırtüstü pozisyonda anestezi uygulanmış bir fare hazırlayın. Karın bölgesini tıraş edin ve dezenfektan bir solüsyon uygulayın. Periton boşluğunu ortaya çıkarmak için bir kesi yapın. Alt portal veni ortaya çıkarmak için nemli bir gazlı bez üzerinde bağırsakları periton boşluğundan dışarı çıkarın.
Adacıklarla önceden yüklenmiş bir insülin şırıngası alın. İğneyi, eğimi aşağı bakacak şekilde portal damara doğrudan paralel olarak yerleştirin. Adacıkları karıştırmak için bir şırıngaya biraz kan çekin ve ardından yavaşça enjekte edin. Tüm adacık süspansiyonunu infüze etmek için pistonu birkaç kez çekin ve itin. Şimdi, enjeksiyon bölgesini kaplamak için bir jelatin sünger yerleştirin.
Hemostatik bir matris olan jelatin, kanı emer ve delinme bölgesi üzerinde stabil bir pıhtı oluşturmak için şişer, böylece kanamayı durdurur. Ardından, bağırsağı periton boşluğuna geri koyun ve insizyonu dikin. Fareyi ev kafesine geri koyun ve iyileşme belirtilerini düzenli olarak izleyin.
Pedal refleksine yanıt eksikliğini onayladıktan sonra, kurumayı önlemek için gözlere merhem sürün. Kürkü çıkarmak için anestezi uygulanmış farenin karnını tıraş edin ve cerrahi alanı %2 iyot ve %75 alkolden oluşan üç alternatif mendille dezenfekte edin.
Daha sonra, karın içinde 1 ila 1,5 santimetrelik bir kesi yapın ve periton boşluğunu açın. Kesiğin etrafına steril bir gazlı bez parçası yerleştirin ve bağırsağı nazikçe gazlı beze aktarmak için forseps veya pamuklu uçlar kullanın. Ardından, bağırsağı tuzlu suya batırılmış bir gazlı bezle örtün ve portal damarı açığa çıkarın.
Jel köpük kullanarak adacık transferine bağlı kanamayı durdurmak için, iğneyi eğim aşağı bakacak şekilde tutun ve iğne ucunu açıklık portal ven duvarına paralel olacak şekilde konumlandırın. İğneyi portal vene sokmadan önce, pistonu tekrar tekrar bastırırken ve geri çekerken adacıkları portal vene infüze etmeden önce adacıklarla karıştırmak üzere şırıngaya 20 ila 50 mikrolitre kan çekmek için pistonu geri çekin.
Tüm adacıklar teslim edildiğinde, enjeksiyon bölgesinin üzerine yaklaşık 0,5 x 0,5 santimetre jel köpük parçası yerleştirin. İğneyi portal damardan çıkarırken jel köpüğü aşağı bastırmak için pamuklu bir uç kullanın. Jeli yaklaşık iki dakika yerinde tutun, portal damarı kapladığından emin olmak için jel köpüğü yuvarlayın.
Kanama durduktan sonra, bağırsağı nazikçe orijinal pozisyonda periton boşluğuna geri koyun ve karın boşluğuna 500 mikrolitre ılık salin enjekte edin. Kas ve cilt katmanlarını kapatmak için dikişler kullanın. Daha sonra, fareyi anesteziden tamamen iyileşene kadar izlemeli bir ısıtma yastığı üzerine temiz bir kafese yerleştirin, her 12 saatte bir analjezi uygulayın ve 48 saat ısıtın.