Antegrad Perfüzyon Modeli: İzole Fare Kalbini Perfüze Etmek İçin Ex Vivo Bir Teknik

Anestezi uygulanmış bir fareyi sırtüstü pozisyona getirerek başlayın. Kalbi görselleştirmek için göğüs boşluğunu inceleyin. Emme basıncı uygulamak ve kalbi farenin vücudundan uca aspire etmek için geniş delikli bir uca sahip bir pipetleyici kullanın. Farenin vücudundan almak için kalbi aorttan çıkarın.

İzole edilmiş kalbi, antikoagülan bir ajan ile desteklenmiş, besin açısından zengin bir tampon içeren bir behere daldırın. Tampondaki antikoagülan, kardiyomiyositlerde - kalp kası hücrelerinde bulunan kalsiyum ile bir kompleks oluşturur, kalp kaslarının kasılmasını durdurur ve kan pıhtılaşmasını önler.

Daha sonra, kalbi apeks tarafı aşağı bakacak şekilde, uygun tampon içeren bir Petri kabında tutulan bir kalp standına yerleştirin. Aortu atriyumun üzerine klempleyin ve klemplenmiş kalbi bir perfüzyon plakasına aktarın.

Daha sonra, uygun bir perfüzyon tamponu içeren bir şırınga iğnesi düzeneği alın. İğneyi ventriküler odayı delerek sol ventriküle sokun.

Aort klemplendiğinde, intraventriküler enjeksiyon aort kapaklarını açmak için baskı yapar. Sonuç olarak, tampon kanı koroner arterlerden antegrad olarak temizler ve kalp kaslarını iyice perfüze eder. Son olarak, tampon pulmoner venlerden geçer. Bu, aşağı akış uygulamaları için başarılı bir şekilde perfüze edilmiş bir kalp sağlar.

Fare kalbi hasadı için, ötenaziyi onayladıktan ve karnı tıraş ettikten sonra, kalbi ortaya çıkarmak için göğüs boşluğunu hızlı bir şekilde açın ve kalbi pipete emmek için ucu yaklaşık olarak kalbin boyutuna kesilmiş plastik bir transfer pipeti kullanın. Kavisli makası yerleştirmek için yeterli alan yaratmak için pipeti kaldırın ve kulakçıklara zarar vermemeye dikkat ederek kalbi sırt tarafından çıkarmak için makası kullanın.

Hemen, kalbi yaklaşık 1 dakika boyunca buz gibi soğuk CIB EGTA içeren 30 mililitrelik bir cam behere yerleştirin. Kasılmalar durduğunda, kalbi buz gibi soğuk CIB EGTA içeren 35 mililitrelik bir kültür kabına yerleştirin ve akciğeri ve diğer görünür dokuyu çıkarın.

Kabaca temizlenmiş kalbi, tepe tarafı aşağı bakacak şekilde soğutulmuş CIB EGTA ile doldurulmuş bir kalp standına yerleştirin ve standı stereoskopik bir mikroskop altına yerleştirin. Aort çevresindeki yağ ve bağ dokularını çıkarın. Kesilen aortun uzunluğu çok uzunsa, aortu brakiyosefalik arterin hemen altından kesin ve kalbi ön yüzey öne bakacak şekilde yönlendirin. Aortun ucunu kaldırmak için cımbız kullanın ve aortu kulakçıkların yakınına sıkıştırmak için küçük bir vasküler kelepçe kullanın ve kulakçıkları hafifçe aşağı doğru itin.

Daha sonra, klemplenmiş kalbi ön tarafı yukarı bakacak şekilde bir perfüzyon plakasına yerleştirin ve kalbi birkaç damla CIB EGTA ile nemlendirin. Antegrad perfüzyon için, esnek bir uzatma tüpüne ve işaretli bir enjeksiyon iğnesine bağlı önceden ısıtılmış CIB EGTA içeren 20 mililitrelik bir şırıngayı infüzyon pompasına yükleyin ve pompayı dakikada 0,5 mililitre akış hızında başlatın. İğne ve pompa doldurulduğunda, enjeksiyon iğnesini çapraz şeklin kısa kenarı önde olacak şekilde perfüzyon plakasına yerleştirin ve iğneyi kalbin tepesine değene kadar kaydırın.

Dikkatlice, iğneyi sol ventrikülün tepesine yakın bir yere, iğneyi plakadan bükmeden veya ayırmadan ventrikül odasına yerleştirin, iğne yerleştirme derinliğini tahmin etmek için işareti izleyin. İğne yerleştirme işlemi tamamlandığında, koroner arterden kan akmaya başlamalıdır.

Enjeksiyon iğnesini plakaya sabitlemek için bant kullanın ve pompa hızını dakikada 1 mililitreye çıkarın. Kalp başarılı bir şekilde perfüze edilirse, kılcal damardaki tamponun akışı epikardın hemen altında görünür olmalıdır.