JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 4:19 dk. • July 8th, 2025
Başlamak için, ötenazi yapılmış bir fareyi sırtüstü pozisyonda sabitleyin. Göğüs boşluğuna erişmek ve kalbi açığa çıkarmak için göğüs duvarından yanal olarak kesin. Sağ atriyumu eksize edin ve kalpten kanı boşaltmak için sol ventriküle salin enjekte edin.
Ana kan damarlarını keserek vasküler bağlantıları kesin. Ayrıca, pulmoner arteri, basınçlandırma için kanal görevi gören ventrikülo-arteriyel bileşkten uygun bir mesafede kesin. Ventriküler tarafı atmosferik basınca maruz bırakmak için ventrikülleri çıkarın.
Şimdi, basınçlandırma sırasında valf yaprakçıklarının hareket etmesine izin vermek için ventrikülo-arteriyel bağlantı ile boru ucu arasında yeterli boşluk sağlayarak pulmoner artere bir basınçlandırma tüpü sabitleyin.
Borunun arteriyel tarafına uygulanacak istenen hidrostatik basınca bağlı olarak pulmoner kapağa göre hesaplanan bir yüksekliğe sabitlenmiş tuzlu su dolu rezervuarı bağlayın. Uygulanan hidrostatik basınç ile arteriyel taraftan tek yönlü akış, kapak yaprakçıklarının kapanmasına ve pulmoner gövdenin şişmesine neden olur.
Daha sonra, rezervuara uygun bir fiksatif yerleştirin ve perfüzyona devam edin. Perfüze fiksatif, hücresel morfolojiyi ve doku mimarisini stabilize eder.
Valfi çevreleyen dokuyu sabitlemek ve kurumayı önlemek için dokunun üzerine sabitleyici ile ıslatılmış bir gazlı bez yerleştirin. Sabit kalp kapakçığını kullanana kadar fiksatif içinde saklayın.
İnce makaslar, mikro forsepsler, mikrovasküler kelepçeler, kelepçe uygulama forsepsleri, mikro iğne tutucular, yaylı makaslar ve ekartörler dahil olmak üzere fare diseksiyonu için gerekli aletleri otoklavlayarak başlayın.
Yetişkin bir C57 Black 6 fareye ötenazi yaptıktan sonra, bir tepsiye sırt yaslanma pozisyonuna getirin, uzuvlarını bantla sabitleyin ve torakotomi yapın. Fazla yağ dokusunu ve fasyayı çıkararak kalbi açığa çıkarın, ardından sağ atriyumu çıkarın ve sol ventrikülü oda sıcaklığında tuzlu su çözeltisi ile perfüze edin.
Superior vena kava, inferior vena kava, pulmoner arter ve aortu keserek tüm kalbi çıkarın ve basınçlandırma için kanal görevi görecek olan ventrikülo-arteriyel bileşkenin yaklaşık 2 milimetre yukarısından kesin.
Odaları atmosferik basınca maruz bırakmak için sol ve sağ ventrikülleri çıkarın ve ventriküllerin çıkarılmasından pulmoner gövde yapısının etkilenmediğinden emin olun. Pulmoner arter ile anastomoz basınçlandırma tüpü, yaprakçıkların ve pulmoner gövdenin büyük hareketlerine uyum sağlamak için sino-tübüler bağlantı ile borunun ucu arasında yaklaşık 1 milimetre mesafe bırakır.
Rezervuarı benzer bir fizyolojik basınca yükseltin ve tuzlu su çözeltisi ile doldurun. Tıkanıklık veya hava kabarcığı olmadığından emin olmak için akış sistemini test edin. Anastomozlu pulmoner valfe bir vana takın ve çıkış yolunu değiştirerek borudan yeterli akışı sağlayın. Akış yeterli olduğunda, çıkışı anastomozlu pulmoner kapağa geçirin ve gövde distansiyonu ile tanımlanan pulmoner gövdenin basınçlandırılmasını sağlayın.
Pulmoner gövdenin basınçlandırılmasını onayladıktan sonra, salin çözeltisinin rezervuar kapasitesinin% 25'i temizlenene kadar kademeli olarak birincil fiksatif çözeltiyi dahil edin. Kurumayı önlemek için doku örneğinin üzerine sabitleyici ile ıslatılmış bir gazlı bez yerleştirin. Sabit bir basıncı korumak için rezervuarı yeniden doldurarak fiksatifi 3 saat boyunca perfüze edin.
Perfüzyondan sonra, kalp kapakçığını 1 haftaya kadar kullanılana kadar 4 santigrat derecede fiksatif solüsyonda saklayın.