JoVE Encyclopedia of Experiments
Biyoloji
0 görüntüleme • 2:53 dk • July 8th, 2025
İdrar yolu enfeksiyonu veya İYE, öncelikle üropatojenik E. coli bakterilerinin böbreklerde, üreterlerde, mesanede veya üretrada kolonizasyonundan kaynaklanır.
Bir İYE murin modeli oluşturmak için, anestezi uygulanmış bir fareyi sırtüstü pozisyona getirerek başlayın. Bir stereomikroskop kullanarak, koyu pembe üretral açıklığı bulmak için farenin alt karın bölgesini görselleştirin.
Şimdi, istenen üropatojenik bakteri çözeltisini içeren bir anjiyokateter ucu ile bir şırınga alın. Kateteri üretraya dik olarak yerleştirin. Şırıngayı yatay olarak konumlandırmak için eğin ve idrar kesesine ulaşana kadar daha fazla itin.
Ardından, bakteri aşısını yavaşça mesaneye aşılayın. Sızıntıyı önlemek için şırıngayı ve kateteri istenen süre boyunca yerinde tutun. Kateteri üretradan yavaşça geri çekin ve bakterilerin çoğalmasına izin verin.
İçeri girdikten sonra, bakteri popülasyonu yüzeysel mesane epitel hücrelerini istila eder ve burada bu hücrelerin sitoplazmasında hücre içi bakteri toplulukları veya IBC'ler oluşturmak için çoğalırlar.
Sonunda, bu bakteriler mesane lümenine salınır ve burada yakındaki hücreleri enfekte ederek enfeksiyonun yayılmasına neden olur.
İYE fare modeli artık daha fazla aşağı akış analizi için hazırdır.
100 mikrolitrelik bir şırıngaya steril bir 24 gauge anjiyokateter ucu monte edin. Şırıngayı hazırlanan bakteri çözeltisi ile doldurun. Bir hayvanı sırtüstü pozisyonda bir çalışma yüzeyine yerleştirin ve damlatma sırasında bir burun konisi kullanarak stabil bir izofluran anestezisi sağlayın. Göz merhemini uygulayın. Hafif bir kompresyon uygulayarak ve suprapubik bölgede dairesel hareketler yaparak kalan idrarı dışarı atın. Ardından, alt karın bölgesini %70 etanol ile temizleyin.
Kateter ucunu normal tuzlu su ile yağlayın. Baskın olmayan elin işaret parmağını karnın üzerine koyun ve yavaşça yukarı doğru itin. Üretranın kateterizasyonunu 90 derecelik bir açıyla dikey olarak başlatın. Dirençle karşılaşıldığında, daha fazla yerleştirmeden önce yatay olarak eğin. Bakteriyel inokulumdan 50 mikrolitre yavaş bir damlatma işlemi gerçekleştirin. Damlatmadan sonra, şırıngayı ve kateteri birkaç saniye daha yerinde tutun ve ardından sızıntıyı önlemek için yavaşça geri çekin.