JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 2:48 dk. • July 8th, 2025
Fare modellerinde kolonoskopik kılavuzluğunda biyopsiler, kolonda yara bölgelerini indükler. Bu yara yatakları, gastrointestinal veya GI sisteminin enflamatuar hastalıklarında yara iyileşme sürecini anlamak için moleküler ve histolojik çalışmalar için izole edilir.
Yara yatağı izolasyonuna başlamak için, sırtüstü pozisyonda kolonoskopik kaynaklı bir yara ile ötenazi yapılmış bir deney faresi yerleştirin. Vücut boşluğunu ortaya çıkarmak için karın derisini ve alttaki kasları kesin.
Kapalı makası kolonun altına yerleştirin ve kaldırın. Kolonu vücuttan ayırmak için orta noktasından ve anüsünden kesin. Dışkı içeriğini gidermek için kolonu uygun bir tamponla yıkayın.
Kolonu filtre kağıdına yerleştirin ve mezenterik tarafı filtre kağıdına bakacak şekilde uzunlamasına kesin. Şimdi, kolonun üzerine metilen mavisi boyası ekleyin ve mikroskop altında gözlemleyin.
Boya, yara yatağındaki ölü ve granül dokuyu lekeleyerek, çevredeki sağlıklı dokudan daha koyu görünmesini sağlayarak kolay tanımlanmasını sağlar. Gen ekspresyonu çalışmaları için izole yara yatağını koruyun.
Uygun deneysel bitiş noktasında, deney hayvanının vücut boşluğunu ortaya çıkarmak için deri ve karın kas katmanlarını açın ve kolonun altına kapalı forseps yerleştirin. Altta yatan mezenterden serbest bırakmak için kolonu yavaşça kaldırın ve dokuyu fareden almak için orta noktasında ve anüsünden kesin.
Dışkı içeriğini temizlemek için buz gibi soğuk PBS ile doldurulmuş ve bir sıçan gavaj iğnesi ile donatılmış 20 mililitrelik bir şırınga kullanın; ve temizlenmiş kolonu bir filtre kağıdına yerleştirin. Mezenterik tarafın filtre kağıdına bakacak şekilde bakmasına dikkat ederek kolonu uzunlamasına açın ve mukozayı %0,2 metilen mavisi ile kaplamak için bir Pasteur pipeti kullanın.
Birkaç saniye sonra, fazla lekeyi boşaltın ve yara yatağını bulmak için kolonu diseksiyon mikroskobu altında görüntüleyin. Yatağın kenarını kesmek için 4 inçlik mikro iris makası kullanın, kas tabakasını kesmemeye dikkat edin ve diseke edilen dokuyu ani dondurma ve/veya saklama için bir tüpe aktarmak için ince uçlu cımbız kullanın.