Myofiber İzolasyonu: Hasat Edilen Fare Ekstansör Digitorum Longus (EDL) Kasından Tek Myofiber Elde Etme Tekniği

Sırtüstü pozisyonda ötenazi yapılmış bir fare ile başlayın. Arka ayağını sterilize edin. Altta yatan arka bacak kaslarını ortaya çıkarmak için cildi ve fasyayı (derinin altındaki ince bir bağ dokusu kılıfı) cerrahi olarak çıkarın.

Tibianın lateral tarafındaki tibialis anterior veya TA kasını bulun. TA distal tendonunu tutarak, kası alttaki dokudan ayırın. TA kasını çıkarmak için kasları dize yakın kesin ve arka ayağın ön bölmesinde bulunan altta yatan ekstansör digitorum longus veya EDL kasını ortaya çıkarın.

Distal EDL tendonunu kesin ve EDL kasını dize doğru çekin. EDL kasını çıkarmak için proksimal EDL tendonunu kesin. Hasat edilen kası, kollajenaz enzimleri içeren önceden ısıtılmış bir besiyeri olan bir tüpe aktarın ve uygun süre boyunca inkübe edin. Kollajenazlar, kas içindeki her bir kas lifini veya miyolifi çevreleyen bağ dokusunu parçalar. Bu sindirim adımı, kasın iç tabakasındaki miyolifleri gevşetir.

İnkübasyonun ardından, miyoliflerin hayatta kalma oranını artırmak için sindirilmiş kası önceden ısıtılmış ortam içeren çok kuyulu bir plakaya dikkatlice aktarın. Plakayı bir stereo mikroskobun ısıtılmış aşamasına aktarın. Şimdi, tek tek miyolifleri çözeltiye ayırmak ve serbe