JoVE Encyclopedia of Experiments
Biyoloji
0 görüntüleme • 2:57 dk • July 8th, 2025
Domuz gözü, çok sayıda melanozom - ışık emilimine yardımcı olan organeller - içeren bir küboidal epitel hücresi popülasyonu içerir ve bu hücrelerin pigmentli görünümüne neden olur. Bu hücrelerin konumuna bağlı olarak, retinanın altında bulunan epitel hücrelerine retina pigment epitel hücreleri veya RPE hücreleri denir ve irisi döşeyenler iris pigment epitel hücreleri veya IPE hücreleri olarak bilinir.
RPE ve IPE hücrelerini izole etmek için bir domuz gözü alarak başlayın. Göz yüzeyine yapışan mikropları temizlemek için gözü uygun bir dezenfektan solüsyona batırın.
Gözü dezenfektan solüsyonundan çıkarın ve irisin yakınında küçük bir kesi yapmak için bir iğne kullanın. İris sınırı boyunca tam bir çevresel kesim yapmak için bu açıklığı kullanın. Bu, gözün iris içeren ön segmentini, retinanın bulunduğu arka göz ampulünden ayırır. Fazla kısmı çıkarın ve iris ile göz ampulünü ayrı kültür kaplarına aktarın.
İris içeren plakaya ve göz ampulüne uygun bir kültür ortamı ekleyin. Dokuyu kazıyın. Mekanik kuvvet, epitel hücrelerini gevşeterek onları ortama bırakır. Ayrılmış IPE ve RPE hücrelerini aspire edin. Onları ayrı kültür plakalarına ekin ve daha fazla kullanılana kadar inkübe edin.
Gözlerden kalan kas dokusunu ve cildi temizleyin ve gözleri iyot bazlı solüsyonda dezenfekte edin ve PBS ile durulayın.
IPE hücrelerini izole etmek için lensi çıkarın ve gösterildiği gibi irisi dışarı çekin. İki süsen hazırladıktan sonra, 1 mililitre tam ortam ekleyin ve düz ateşte parlatılmış Pasteur pipeti ile çizerek hücreleri izole edin, ardından hücreleri sayın ve tohumlayın. Plakayı inkübatöre yerleştirin.
RPE hücrelerini izole etmek için, vitreus ve retinayı arka segmentten çıkarın ve ampulü bir Petri kabına yerleştirin. Ampulü 1 mililitre tam orta ile doldurun. Kavisli bir ateşle parlatılmış Pasteur pipeti kullanarak, RPE hücrelerini çıkarın, 1.000 mikrolitrelik bir pipet kullanarak hücre süspansiyonunu ampul içinde toplayın ve yeniden süspansiyon için 1,5 mililitrelik bir tüpe aktarın. Ardından, hücreleri sayın ve tohumlayın ve daha önce gösterildiği gibi plakayı inkübe edin.