JoVE Encyclopedia of Experiments
Biyoloji
0 görüntüleme • 3:02 dk • July 8th, 2025
Domuz oositi, kümülüs-oosit kompleksini veya COC'yi oluşturan kompakt, çok katmanlı bir kümülüs hücresi kümesi ile çevrilidir. En içteki kümülüs hücreleri, süreçleri oositin zona pellucida'sı boyunca uzatır. Bu işlemler, oosit ve çevresindeki kümülüs hücreleri arasındaki moleküllerin hücreler arası transferine yardımcı olan hem boşluk hem de ara bağlantılar geliştirir. Bu çift yönlü etkileşimler, başarılı in vitro fertilizasyon veya IVF'nin çok önemli bir belirleyicisi olan COC'lerin canlılığını korur.
COC'leri izole etmek için, birkaç domuz yumurtalık folikülünü olgunlaşma ortamını içeren bir Petri kabına batırın. Bu besiyeri in vitro oosit olgunlaşması için gerekli hormonları içerir. COC'leri ve foliküler sıvıyı Petri kabına bırakmak için yumurtalık foliküllerini inceleyin. Bu sıvı, olgunlaşma ortamını oosit yeterliliği için gerekli olan ek besinler ve hormonlarla tamamlar.
Serbest bırakılan foliküler içeriği aspire edin ve başka bir Petri kabına aktarın. Orta derecede granüle sitoplazmaya sahip yuvarlak oositlerden ve kümülüs hücreleriyle çevrili sağlam bir polar gövdeden oluşan normal morfoloji sergileyen hasarsız COC'leri tanımlamak için plakayı mikroskop altında görselleştirin.
Tek bir COC'yi izole edin ve bunu bir IVF plakasının olgunlaşma ortamı içeren merkezi kuyucuğuna aktarın. Plakayı daha fazla kullanana kadar optimum sıcaklıkta saklayın.
COC'leri orta büyüklükteki folikoidlerden izole etmek için, iki ila üç yumurtalığı HM ile doldurulmuş steril 10 cm'lik bir Petri kabına aktarın. Çıkıntılı yumurtalık foliküllerinin yüzeyini, foliküler sıvının ve COC'lerin Petri kabına akmasına neden olacak steril bir cerrahi # 15 bıçakla nazikçe kesin. Foliküler içeriği tek kullanımlık bir şırıngaya bağlı 28 gauge bir iğne ile aspire edin ve başka bir Petri kabına aktarın.
IVF Petri kaplarını hazırlamak için, merkezi kuyucuklara 1 mililitre HM ekleyin ve dış halkalara üç ila dört damla HM yerleştirin. Ardından, hasar görmemiş COC'leri dış halkalardaki HM damlalarına taşımak için bir polikarbonat mikropipet kullanın ve bunları üç ila dört kez kısaca durulayın. Bittiğinde, bunları ayrı ayrı merkezi kuyuya aktarın. IVF plakalarını inkübatörde saklayın.
Bu makale, domuz yumurtalıklarından kumulus-oosit komplekslerinin (KOK'lar) izole edilmesi için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır. İzole edilen KOK'lar, oositlerin canlılığını ve gelişimsel yetkinliğini korudukları için in vitro fertilizasyon (IVF) çalışmaları ve fertilite tedavileri için temel öneme sahiptir.
Domuz cumulus-oosite komplekslerinin (COK'lar) güvenilir şekilde izole edilmesi, erken evre üreme biyolojisi ve fertilite araştırmalarının temelini oluşturarak kontrollü in vitro fertilizasyon (IVF) çalışmalarına olanak tanır. Bu teknik, oosit canlılığı ve gelişimsel kapasitesine dair öngörüsel güvenilirliği destekleyerek, assay geliştirme ve translasyonel model sadakati üzerinde doğrudan etki yaratır. Standartlaştırılmış COK hazırlama işlemi, üreme teknolojisi süreçlerinde ölçeklenebilir ve tekrarlanabilir iş akışları için gereklidir.
Bu COC izolasyon protokolü, erken keşif ve analiz geliştirme aşamaları arasındaki geçiş noktasına hitap ederek IVF, maturasyon ve gelişimsel yetkinlik çalışmaları için temel materyal sağlar.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 29 Ağustos 2026