JoVE Encyclopedia of Experiments
Biyoloji
0 görüntüleme • 3:29 dk • July 8th, 2025
Bir kültür kabında florlu etilen propilen veya FEP tozundan oluşan bir yatak hazırlayın. FEP tozunun üzerine kümülüs-oosit kompleksleri veya COC'ler içeren bir damla olgunlaşma ortamı ekleyin. Sıvı bir mermer veya LM oluşturmak için damlayı tozun üzerinde yavaşça yuvarlayın. FEP tozu, iç sıvı ile çevredeki ortam arasında gaz alışverişine izin veren hidrofobik gözenekli bir kabuk oluşturur.
Şimdi, LM ünitesini toplayın ve bir IVF Petri kabının merkezi kuyusuna aktarın. COC'leri nemli tutmak için dış halkaya steril su ekleyin. Daha sonra, oosit olgunlaşmasına izin vermek için LM'yi fizyolojik koşullar altında inkübe edin.
Ardından, harcanan ortamı çıkarın ve yeni bir olgunlaşma ortamı ekleyin. Doğrudan sıvı teması, hidrofobik FEP kabuğunu bozar ve COC'leri serbest bırakmak için LM'yi kırar. Serbest bırakılan COC'leri taze bir damla olgunlaşma ortamı içeren yeni bir kaba aktarın ve FEP parçacıklarını çıkarmak için yıkayın.
Yıkadıktan sonra, COC'leri ve taze ortamı FEP toz yatağına aktarın. Damlayı tozla kaplamak için yuvarlayın. Son olarak, LM'yi IVF Petri kabına aktarın. FEP toz boyalı LM'ler, oositlerin 3D yapısını korur ve canlılıklarını arttırır.
30 milimetrelik bir Petri kabında 5 gram FEP tozundan oluşan bir yatak yapın. FEP tozu üzerine 3 ila 5 COC içeren tek bir olgunlaşma ortamı damlası dağıtın. Parçacıkların sıvı damlasının yüzeyini tamamen kapladığından ve sıvı bilyeler veya LM'ler oluşturduğundan emin olmak için plakayı dairesel hareketlerle hafifçe döndürün.
Birkaç 60 milimetrelik IVF Petri kabı hazırlayın ve bir nem odası oluşturmak için dış halkalara 3 ila 4 mililitre steril su ekleyin. Şekillendirilmiş LM'yi 1.000 mikrolitrelik bir pipetle alın ve merkezi kuyuya yerleştirin. Mermerleri %5'lik bir karbondioksit inkübatörde 38 santigrat derecede dört gün boyunca inkübe edin.
Ortamı değiştirmek için, her LM'ye 30 mikrolitre olgunlaşma ortamı uygulayın, bu da yayılmasına neden olacaktır. Mermer içeriği çözüldüğünde, biyoreaktörden salınan COC'leri Petri kabındaki bir damla taze olgunlaşma ortamına aktarın. Olgunlaşma ortamında 3 ila 4 yıkamadan sonra, COC'leri 30 mikrolitre taze ortamla birlikte FEP toz yatağına aktarın.
Toz parçacıklarının sıvı damlasının yüzeyini tamamen kaplamasını ve yeni bir LM oluşturmasını sağlamak için plakayı dairesel hareketlerle yavaşça döndürün. Ardından, LM'yi IVF Petri kabına aktarın.