JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 4:11 dk. • July 8th, 2025
Domuz korneasının en iç tabakası - şeffaf avasküler ön göz kısmı - bazal membran tarafından desteklenen kornea endotel hücrelerinden veya CEC'lerden oluşur - Descemet membranı veya DM. CEC'ler kornea şeffaflığını ve optimal görüşü korur. Onlara verilen herhangi bir hasar görüşü etkileyebilir.
Seçici CEC hasarı için, uygun bir ortamda taze hasat edilmiş bir domuz gözü ile başlayın. Çevredeki dokuları çıkarın. Yüzey mikrobiyal kontaminasyonunu ortadan kaldırmak için göze uygun bir dezenfektan uygulayın. Tuzlu suyla yıkamanın ardından, lazer ışınlamasından önce herhangi bir anormalliği ekarte etmek için ön gözü optik olarak inceleyin.
Gözü, belirli bir dalga boyunda bir lazerle donatılmış bir yarık lamba ünitesinin önünde özelleştirilmiş bir tutma aparatına sabitleyin. Tek tek kornea katmanlarını görselleştirin. Uygun lazer enerjisi ve odak noktası konumu ile lazer darbelerini kornea endotel tabakasına yönlendirin. Odaklanmış kısa süreli, yüksek güçlü darbeler, ısı yayılımını önlerken açıkta kalan yüzeyden seçici CEC yırtılmasına neden olur, böylece DM veya stromal dokuyu korur.
Limpusa yakın bir giriş portu oluşturarak - korneoskleral bileşke, korneayı stabilize etmek ve kalan CEC'leri korumak için korneayı içeren ön odaya viskoelastik bir çözelti enjekte edin. Lazerle işlenmiş kornea segmentini, CEC tarafı yukarı bakacak şekilde ortam içeren çok kuyulu bir plakaya eksize edin ve aktarın. Ex vivo kornea endotel yaralanması modeli daha ileri çalışmalar için kullanılabilir.
Yerel mezbahadan taze enükleasyonlu domuz gözleri elde ettikten sonra, numuneleri 4 santigrat derece, tam orta dereceye yerleştirin. Hücre dışı dokuları çıkarmak için makas kullanın ve gözleri beş dakika boyunca% 5 povidon-iyot oftalmik solüsyonuna batırın. Ardından, dezenfekte edilmiş numuneleri oda sıcaklığında steril PBS'ye yerleştirin.
Spektral alanlı optik koherens tomografi cihazı kullanarak, gözleri kornea yara izi, ödem ve diğer opaklıklar gibi ana ön segment patolojileri için tarayın. Taramadan sonra, gözleri 1064 nanometre dalga boyuna ve havada 10 mikrometre odak noktası çapına sahip bir Nd: YAG lazer ile donatılmış bir yarık lamba ünitesinin önüne yerleştirin. 12X büyütmeyi seçin ve tek tek kornea katmanlarını görselleştirmek için aydınlatmayı saptırın.
Nabız enerjisini ve odak noktasını kornea endotel hücrelerinin seçici ablasyonu için uygun parametrelere ayarladıktan sonra, dokuya birkaç lazer atışı uygulayın. Daha sonra, diseksiyon mikroskobu altında, limbusa yakın şeffaf bir kornea parasentezi yerleştirin ve iç hazneyi stabilize etmek için viskoelastik enjekte edin. Daha sonra, lazerle tedavi edilen merkezi korneayı çıkarmak için 8 milimetrelik bir trephine kullanın ve izole edilmiş korneayı, endotel tarafı yukarı bakacak şekilde 12 oyuklu bir plakanın bir kuyusuna yerleştirin. Tüm kornealar toplandığında, her numune kuyucuğuna 3 mililitre tam ortam ekleyin ve numuneleri 37 santigrat derecede üç güne kadar inkübe edin.