Domuz Aort Endotel Hücresi (pAEC) İzolasyonu: Hasat Edilen Domuz Abdominal Aortundan Endotel Hücrelerini İzole Etmek İçin Enzim Tabanlı Bir Yöntem

Oksijenli kanı kalpten vücuda taşıyan ana arter olan aort, üç katmandan veya 'tuniklerden' oluşur: bir iç intima, bir orta medya ve bir dış adventitia. Endotel hücreleri veya EC'ler, intimada, başta kollajen olmak üzere yapısal proteinlerden oluşan destekleyici bir bazal membran üzerinde ince, sürekli bir tek tabaka olarak bulunur.

EC'leri izole etmek için, bir kültür kabında hasat edilmiş bir domuz aortu ile başlayın. Endotel dışı hücre kontaminasyonunu önlemek için uçlarını ve çevresindeki yapışık dokuları eksize edin. Mikrobiyal büyümeyi engellemek için aortu antibiyotik içeren tamponla yıkayın.

Aorttan steril bir cerrahi dikiş geçirin ve dikişi lümen içinde tutarak uçlarından birini bağlayın. Bağlı ucu sabitleyin ve aortu tamamen ters çevirmek için dikişi geri çekin. Bu, EC içeren intimayı enzimatik sindirime maruz bırakır. Optimal enzim aktivitesi için aortu önceden ısıtılmış, düşük konsantrasyonlu kollajenaz çözeltisi ile tedavi edin ve inkübe edin.

Kollajenaz, EC'lerin altında yatan bazal zarda bulunan kollajen proteinlerini parçalayarak ayrışmalarını başlatır. İnkübasyon sonrası, kollajenaz enzimlerini etkisiz hale getirmek için soğutulmuş tampon ekleyin.

Aort intimal yüzey