Sivrisinek Embriyo Mikroenjeksiyonu: Germ Hattı Mutasyonları Oluşturmak için Anopheles Gambiae'nin Embriyo Sarısına Ekzojen DNA Verme Tekniği
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:12 dk. • July 8th, 2025
Ekzojen DNA'yı Anofel embriyosuna mikroenjekte etmek için, istenen sayıda taze hasat edilmiş, blastoderm öncesi, sivrisinek yumurtası alın. Bu erken gelişim aşamasında, yumurta hücresel yapılar oluşturmadan çekirdekler içerir.
Tekne şeklindeki yumurtaları, bir cam kaydırağın yüzeyinde bulunan nemli bir kurutma kağıdının çevresine yerleştirin. Bu adım, sonraki adımlarda enjeksiyon kolaylığı için embriyonun yeterli hidrasyonunu sağlar. Yumurtaları, ventral yüzeyleri dışa bakacak şekilde birbirine bitişik olarak hizalayın.
Şimdi, istenen plazmit çözeltisini içeren dar delikli bir mikroenjeksiyon iğnesi alın. İğneyi yumurtanın arka kutbunun yakınına yerleştirmek için bir diseksiyon mikroskobu kullanın - germ hücresi öncüleri için bir alan. İğneyi, ekzokoryonu - dış tabakayı - ve endokoryonu - yumurta kabuğunun bir iç tabakası - deleceği ve sonunda embriyoya ulaşacağı uygun bir açıyla yerleştirin.
Plazmit karışımını embriyonun sarısına enjekte edin. İğneyi nazikçe geri çekin ve yumurtaların uygun koşullar altında büyümesine izin verin. Yumurta büyüdükçe, bazı çekirdekler arka kutba göç eder ve burada mikroenjekte edilen DNA'yı dahil edebilirler. Bu çekirdekler daha sonra gametler haline
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin