Agrobakteri Aracılı Genetik Dönüşüm: Genetik Olarak Tasarlanmış Agrobacterium tumefaciens ile Pirinç Genomunu Genetik Olarak Dönüştürmek İçin Bir Yöntem

Bitki patojenik bir bakteri olan Agrobacterium tumefaciens, transfer DNA'sında veya T-DNA bölgesinde ilgilenilen bir geni taşıyan yapay olarak hazırlanmış bir Ti plazmidi ve T-DNA'yı bitki hücrelerine aktarmak için virülans veya Vir genlerini taşıyan bir yardımcı plazmid eklenerek genetik olarak tasarlanabilir.

Agrobacterium aracılı genetik dönüşüm için, genç bir pirinç salkımı ile başlayın ve küçük parçalar halinde kesin. Kesimleri bir büyüme ortamına aktarın ve kesimlerin kallus adı verilen farklılaşmamış bir hücre kütlesine büyümesini kolaylaştırmak için kuluçkaya yatırın.

Şimdi, kallusu, Agrobacterium için bir kemoatraktan olan asetosiringon içeren bir Agrobacterium infiltrasyon ortamına aktarın. Daha sonra, ortama genetik olarak tasarlanmış bir Agrobacterium kültürü ekleyin ve kısa bir süre inkübe edin.

Asetosiringon molekülleri, Agrobacterium zarı üzerindeki hücre reseptör proteinini - VirA - aktive eder ve bu da bir transkripsiyonel aktivatör proteini olan VirG'nin fosforilasyonuna daha fazla aracılık eder. Fosforile VirG, yardımcı plazmide doğru hareket eder ve kanal proteinleri ve endonükleazlar - VirD1 ve VirD2 dahil olmak üzere bir dizi virülans geninin transkripsiyonunu