JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:59 dk. • July 8th, 2025
Primer nöronal hücrelere elektroporasyon bazlı plazmit DNA iletimi için, uygun elektroporasyon ortamında hücrelerin askıya alınmasıyla başlayın. Elektroporasyon karışımını hazırlamak için floresan protein kodlayan plazmit DNA'sını ekleyin.
Elektroporasyon karışımını nazikçe bir elektroporasyon küvetine aktarın ve elektroporasyon verimliliğini olumsuz etkileyebilecek hava kabarcıklarından kaçının. Küveti elektroporatörün küvet tutucusuna aktarın; Elektroporasyon parametrelerini ayarlayın. Elektroporasyonu başlatın.
Hücre zarı boyunca uygulanan yüksek voltajlı kısa elektrik darbeleri, zarın her iki tarafında diferansiyel yük birikimine neden olarak, transmembran potansiyelini, hücre zarı boyunca voltajı arttırır.
İndüklenen transmembran potansiyeli, lipid çift tabaka parçalanma potansiyelini aştığında, lipid çift tabakası, hücre zarı üzerinde geçici hidrofilik gözenekler oluşturarak lokalize konfigürasyon değişikliği ile kararsızlaşır. Yeterli büyüklükteki gözenekler, plazmit DNA'nın hücre sitoplazmasına girmesi için bir yol sağlar.
Elektroporasyonun tamamlanmasının ardından, lipid çift tabakası yeniden kapanır, hücre zarı çift tabaka bütünlüğünü geri kazandırır, böylece plazmit DNA'
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin