JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:23 dk. • July 8th, 2025
Plazmitleri nükleofeksiyon yoluyla sporozoit çekirdeklerine iletmek için, tampon içinde izole, canlı sporozoitlerin - parazitlerin hareketli, enfeksiyöz aşaması - süspansiyonu ile başlayın. Sporozoitler, bir dış plazma zarı ve yapısal stabilite ve hareketlilik için kritik olan bir dizi düzleştirilmiş vezikül ve proteinden oluşan altta yatan bir iç zar kompleksi ile çevrili ince şekilli hücrelerdir.
Sporozoitleri peletlemek için süspansiyonu santrifüjleyin. Sporozoit peletini, floresan protein kodlayan plazmitlerle desteklenmiş uygun bir hacimde nükleer transfeksiyon tamponu içinde yeniden süspanse edin. Yüksek tamponlama kapasitesine ve iyonik kuvvete sahip nükleer transfeksiyon tamponu, sporozoit işlevselliğini korurken verimli transfeksiyon sağlar.
Süspansiyonu bir nükleer transfeksiyon küvetine aktarın. Küveti bir nükleofeksiyon cihazının tutucusuna yerleştirin. Uygun nükleofeksiyon programını çalıştırın.
Çekirdeklenme sırasında, özel olarak uygulanan, kısa, yüksek voltajlı darbeler, tampon bileşenleri ile birlikte, plazma zarını ve iç zar kompleksini geçici olarak bozarak, plazmitlerin sitoplazmaya erişimini sağlayan transmembran gözenekleri oluşturur.
Aynı zamanda, bu yüksek m
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin