Lentiviral Vektör Bazlı Perivitellin Enjeksiyonu: İlgilenilen Geni Döllenmiş Tek Hücreli Fare Oositlerine Dönüştürmek İçin Bir Yöntem

Transfeksiyon yapmak için, bir damla uygun ortamda asılı taze döllenmiş fare yumurtaları içeren özel bir oda alın. Bu aşamada yumurta, hem baba hem de anne pronükleuslarını içeren büyük bir merkezi oosit içerir.

Oosit, hyaluronik asit açısından zengin hücre dışı matris içine gömülü yakından düzenlenmiş kümülüs hücresi kümeleriyle çevrili, glikoprotein açısından zengin bir zona pellucida ile kaplıdır. Şimdi, yumurtaları hyaluronik asidi sindiren hyaluronidaz enzimi ile tedavi edin. Bu, kümülüs hücrelerini ayırır ve sonunda oositi çevreleyen zona pellucida'yı açığa çıkarır.

İşlem görmüş tek bir oositi tutma pipetinin ucuna yakın bir yere yerleştirin ve konumunu sınırlamak için emme basıncı uygulayın. Viral zarf içinde kapsüllenmiş bir transgen taşıyan, tasarlanmış bir lentiviral vektör süspansiyonu içeren dar delikli bir mikroenjeksiyon iğnesi alın. Bu retrovirüsler, konakçı genomuna entegre olma kapasitesine sahiptir.

Daha sonra, en dıştaki zona pellucida ile en içteki plazma zarı arasındaki bir boşluk olan perivitellin boşluğuna ulaşmak için iğneyi zona pellucida'dan delin. Lentiviral vektör süspansiyonunu perivitellin boşluğuna yerleştirin ve transdüksiyonu kolaylaştırmak için ink