Lazer Destekli Lentiviral Gen Dağıtımı: Lentiviral Gen Dağıtımını Kolaylaştırmak için Fare Döllenmiş Yumurtalarını Geçirgen Hale Getirme Tekniği

Lazer destekli lentiviral gen iletimi, bir transgeni bir konakçı sisteme aktarmak için kullanılan bir tekniktir.

Transgenik fareler üretmek için, uygun bir kültür ortamında izole edilmiş fare döllenmiş yumurtaları ile başlayın. Döllenmiş yumurta içeren kültür kabını, bir lazer aparatı ile önceden kurulmuş ve bir kontrol yazılımına bağlı bir mikroskop aşamasına yerleştirin. Uygun büyütme oranında gözlemleyin.

Döllenmiş yumurtalar, lentiviral partikülleri engelleyen koruyucu bir glikoprotein tabakası olan zona pellucida ile çevrilidir. Bu bariyeri nüfuz etmek için lazer cihazını açın ve lazer LED'inin zona pellucida üzerinde görünür olduğundan emin olun. Kontrol yazılımını kullanarak lazeri ateşleyin. Ateşleme süresini istenen perforasyon çapına göre ayarlayın.

Yumurtaları kurtarma için bir kuluçka makinesine yerleştirin. Kısa bir inkübasyondan sonra, yumurtaları çıkarın ve ilgilenilen geni taşıyan lentivirüs parçacıkları ve floresan seçilebilir bir işaretleyici ekleyin.

Zona pellucida delikli olduğunda, lentivirüs yumurta hücresi zarına doğru kolayca yayılır ve endositoz yoluyla girer. Lentivirüs parçalarına ayrılır ve RNA'sını serbest bırakır, bu da sırayla çift sarmallı bir DNA'ya