Biyolistik Aracılı Gen Transferi: İlgilenilen Geni Bir Biyolistik Gen Tabancası ile Hedef Hücrelere İlgilendirme Tekniği

Bir mikrosantrifüj tüpünde optimum hacimde altın boncuklarla - biyolojik olarak inert ve toksik olmayan gen dağıtım araçları - ile başlayın. Daha sonra, katyonik ajanlar ekleyin - spermidin ve kalsiyum klorür, ardından altın boncuklara istenen DNA parçaları gelir. Tüpü nazikçe hafifçe vurun ve inkübe edin.

Kalsiyum klorür, DNA fragmanlarına bağlanır ve spermidin kalıntıları yoluyla altın boncuklar üzerine kaplanmasını kolaylaştırır. Ardından, çözücüyü santrifüjleyin ve çıkarın. DNA kaplı boncukları etanol içinde yeniden süspanse edin. Boncukları steril bir makro taşıyıcı diske nazikçe pipetleyin. Kurumasını bekleyin.

Bir helyum gazı hızlandırma tüpü ve bir yırtılma diski ve ilgili yuvalarında bir durdurma ekranı bulunan bir bombardıman odası içeren bir biyolistik gen tabancası cihazı kurun. Ardından, makro taşıyıcı diski ters çevirin ve yırtılma diskinin altına yükleyin.

Daha sonra, kültürlenmiş hedef konakçı hücreleri, dönüşüm verimliliğini artırmak için ozmotik bir stabilizatör olan sorbitol ile desteklenmiş uygun bir katı ortama yerleştirin. Kurulum hazır olduğunda, gen tabancasını ateşleyin.

Helyum hızlanma tüpünden aşağı doğru hareket ederken, yırtılma diski kırılana kadar bas