Nil kırmızısı boyama: alglerde hücre içi nötr lipidleri tespit etmek ve ölçmek için bir teknik

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biyolojik Teknikler

0 görüntüleme • 3:32 dk • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Algler, biyodizel üretimi için nötr lipitler gerekli olan çeşitli lipitler üreten suda yaşayan fotosentetik organizmalardır.

Nötr lipitleri tespit etmek ve miktarını belirlemek için, optimum hacimde bir alg süspansiyonu ve etanolü siyah bir mikrotitre plaka kuyusunda karıştırın. Çoğu lekenin nüfuz etmesini önleyen alg hücre duvarı ve zarı, etanole maruz kaldığında geçirgen hale gelir. Daha sonra, etanolü yağda çözünen bir floresan boya ile birleştirin - Nil kırmızısı. Bu karışımı yosun içeren kuyuya ekleyin.

Mikrotitre plakasını bir spektrofotometreye yerleştirin. Boya ve algler arasındaki etkileşimi kolaylaştırmak için aralıklı çalkalama ile inkübasyonu sağlayan bir program ayarlayın.

Nil kırmızısı hidrofobik olduğu için sitoplazmayı kolayca geçemez. Etanol gibi çözücüler, Nil kırmızısı ile birleştiğinde, boyayı harekete geçirir ve sitoplazmada dağılmış lipit cisimciklerine ulaşmasına yardımcı olur. Nil kırmızısı daha sonra lipit cisimlerine nüfuz eder ve orada çözünür, böylece lipitleri lekeler.

Lipid eksikliği olan hücreler, koyu cisimlere sahip floresan halkalar olarak görünürken, lipid açısından zengin hücreler, lipit cisimlerinin biriktiği yerde parlak turuncu-kırmızı bir parıltı gösterir.

Hücreleri boyadıktan sonra, nötr lipitleri maksimum düzeyde uyaran bir dalga boyuna maruz bırakın. Elde edilen floresansı kaydedin ve test numunelerindeki nötr lipitleri ölçmek için bir kalibrasyon eğrisi ile ilişkilendirin.

Florometrik miktar tayini için, tüm alg numunelerini aynı biyokütle konsantrasyonunda ve ölçümde kullanılan standartlarla aynı şekilde hazırlayın. Bunu, önceden kurutulmuş numuneleri uygun miktarda fosfat tamponunda askıya alarak yapın. Gerekirse, kurutulmuş alg hücrelerinin yeniden süspansiyonunu kolaylaştırmak için bir homojenizatör kullanın.

Her numune için, 80 mikrolitre hazırlanmış% 30 etanol çözeltisi, 10 mikrolitre hazırlanmış Nil Kırmızısı çözeltisi ve 10 mikrolitre yosun süspansiyonunu 96 oyuklu bir plakanın tek bir oyuğunda karıştırın. Floresan ölçümünün değişkenliğini doğru bir şekilde hesaba katmak için, her numunenin beş kopyasını gerçekleştirin. Ardından, cihazdaki ve hazırlıktaki günlük değişiklikleri hesaba katmak için daha önce hazırlanmış standartlarla iki noktalı bir kalibrasyon eğrisi çalıştırın.

Floresan ölçümlerini çok kuyulu bir plaka okuyucu spektrofotometresinde gerçekleştirmek için, parametreleri 1.200 rpm'de sallanacak ve 30 saniye boyunca 3 milimetre yörüngede kalacak, ardından 10 dakika boyunca 40 santigrat derecede inkübe edecek şekilde ayarlayın. 1.200 rpm'de başka bir sarsıntı ve 30 saniye boyunca 3 milimetre yörüngede ve 530 nanometrede uyarma ve 604 nanometrede emisyon ile floresan kaydetmek için. Ardından, çalıştırmayı başlatın. Son adım olarak, dahili standartlardan elde edilen sonuçları kullanarak floresan ölçümlerini yağ içeriğine dönüştürün.

09:10

Ticari dan Eş Çarpımların olarak Alkenones izolasyonu ile Biyodizel Üretimi için Deneysel Protokolü Isochrysis Alg Biyokütle

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:22

Lipid dizin belirlenmesi mantar patojen Ustilago Maydis sıvı Floresans kurtarma tarafından

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:08

Kabarcık sütun Photobioreactors ve bir tahlil yeşil mikroalg ekimi için nötr lipitler

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:34

C. elegans'ın Nil Kırmızısı Boyanması: Sabit Hayvanlarda Lipid Damlacıklarını Görselleştirmek İçin Bir Yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:44

Yağ Kırmızısı O Boyama: İn Vitro Hepatik Steatozu Tespit Etmek için Hepatositlerde Nötr Lipidlerin Boyanması İçin Bir Teknik

İlgili videolar

0 Görüntüler

16:07

Fat Kütle Biyokimyasal ve Yüksek Verimli Mikroskobik Değerlendirme Caenorhabditis Elegans

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:44

Mikroalglerden yağlı asit içeriği ve bileşimi analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:56

Floresan kullanma Alg hücrelerinde nötral Lipidler Ölçüm Basit ve Hızlı Protokolü

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:46

Lipid bolluk ve değerlendirme Lipid dağılımı Nil kırmızı ve O kırmızı petrol boyama tarafından Caenorhabditis elegans miktar

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:54

Kırmızı Alg Fizyolojisini Değerlendirmek için Otofloresan Görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026