Aortik Vasküler Düz Kas Hücrelerinin Von Kossa Boyama: Arteriyel Medial Tabaka Kalsifikasyonunun Değerlendirilmesi İçin İn Vitro Teknik
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:10 dk. • July 8th, 2025
Vasküler düz kas hücreleri veya VSMC'ler, kan damarı duvarının orta tabakası olan tunika ortamındaki belirgin hücresel bileşenlerdir. Patolojik ipuçlarına veya yaşlanmaya yanıt olarak, bu hücreler vasküler kalsifikasyona aracılık eder - hücre dışı matriste kalsiyum birikimi olgusu.
Önceden kalsifiye edilmiş, murin aort VSMC kültürünün yapışkan bir tabakası içeren çok kuyulu bir plaka alın. Hücresel proteinleri çapraz bağlamak için hücreleri formalin çözeltisi ile inkübe edin ve boyamadan önce VSMC yapısını stabilize edin.
Kuyudan formalini aspire ederek ve gümüş nitrat çözeltisi ekleyerek von Kossa boyamaya başlayın. Plakayı uygun bir ışık kaynağı altında inkübe edin.
Gümüş nitrat çözeltisi, VSMC tabakasının hücre dışı matrisindeki kalsifikasyon bölgelerine ulaştığında, gümüş iyonları fosfata bağlı kalsiyum iyonlarının yerini alır. Bu, geçici bir sarı renklenmeye neden olur. Organik madde ve ışığın varlığında, gümüş fosfatın fotokimyasal bozunması, siyah renkli metalik gümüş oluşumuna neden olur.
Maksimum harcanan gümüş nitrat çözeltisi miktarını atın. Hücreleri sodyum tiyosülfat çözeltisi ile tedavi edin. Bu çözelti, artık gümüş tuzlarını suda çözünür bir komplekse dönüştürür ve b
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin