TEM Izgaraları Üzerinde Virüs Örneklerinin Kapsül Bazlı Negatif Boyanması: Zarflı Virüslerin Üst Yapısını Görselleştirmek İçin Bir Ağır Metal Boyama Tekniği

Zarflı virüslerin negatif boyanması için, istenen viral süspansiyon ile başlayın. Virüsleri kimyasal bir fiksatif olan glutaraldehit ile inkübe edin. Penetrasyon üzerine, glutaraldehit viral proteinleri ve nükleik asitleri çapraz bağlar, morfolojiyi korurken virüsleri etkisiz hale getirir ve böylece güvenli virüs kullanımını kolaylaştırır. Bu karışımı çok kuyulu bir plakaya aktarın.

Transmisyon elektron mikroskobu, TEM, kapsül içeren ızgaraları bir kuplör aracılığıyla bir pipete takın. Pipeti kullanarak, virüs fiksatif karışımı kapsülün içine aspire edin. Virüslerin ızgara yüzeylerine adsorbe olması için pipet tertibatını inkübe edin.

Karışımı çıkarın. Kapsülü yıkayın, yapışmayan virüsleri ve fiksatifleri çıkarın. Ağır metal bazlı bir leke olan uranil asetat çözeltisini kapsülün içine pipetleyin. Lekenin virüslerle temas etmesini sağlamak için inkübe edin.

Uranil iyonları, viral yüzeylerdeki spesifik zar glikoproteinlerine ve fosfolipidlere bağlanır. İyonlar virüslere nüfuz edebilir ve genomu çevreleyen nükleokapsid proteinlerine bağlanabilir. Bu bağlanma, virüs ve spesifik viral yapılar etrafında ağır metal iyon agregasyonunu ve birikimini indükler.

Kapsülü ayırın. Izgaralardaki f