JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:14 dk. • July 8th, 2025
Yumuşak doku mikro ortamlarında hücre sitoplazmasına özgü boyama için, yeni hasat edilmiş bir fare böbreği elde edin. Formaldehit, buzlu asetik asit ve metanol içeren fiksatif bir çözelti ile muamele edin. Düşük sıcaklıklarda inkübe edin.
Formaldehit hücrelere nüfuz eder, proteinleri proteinlere ve proteinleri nükleik asitlere çapraz bağlar. Metanol, dokudaki suyun yerini alır ve proteinleri pıhtılaştırır. Asetik asit, hücre içi asitleşmeye ve doku şişmesine neden olur, böylece metanolün neden olduğu doku büzülmesine karşı koyar.
Fiksasyon, enzimleri inaktive eder ve sonraki boyama için doku morfolojisini stabilize eder. Tampon kullanarak fazla fiksatifleri çıkarın. Dokuyu asidik bir boya olan eozin Y ile inkübe edin.
Eozin sabit hücrelere nüfuz eder ve sitoplazmaya girer. Asetik asit muamelesinden sitoplazmanın asidik ortamı, sitoplazmik proteinlerin amino gruplarının maksimum protonasyonuna neden olur.
Negatif yüklü fonksiyonel gruplara sahip eozin, protonlanmış protein grupları ile elektrostatik olarak etkileşime girerek kararlı bir boya-protein kompleksi oluşturur ve birikme üzerine sitoplazmayı pembeye boyar. İnkübasyon sonrası, lekeli böbreği küçük parçalara ayırın, ardından
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin