Parafine gömülü doku bölümlerinin H&E boyama: hematoksilen ve eosin boyalarının kombinasyonunu kullanarak karaciğer dokusu kesitlerini görselleştirmek için diferansiyel boyama tekniği

Parafine gömülü doku bölümünü içeren bir cam slayt alarak Hematoksilen ve Eozin boyamaya başlayın. Slaytı, doku etrafındaki parafin tabakasını çözen ve sonraki adımlarda lekelere erişilebilir hale getiren organik bir çözücü olan ksilen içeren bir deparafinizasyon çözeltisine batırın.

Ksileni çıkarmak için doku bölümüne mutlak alkol uygulayın. Dokuyu azalan alkol konsantrasyonlarına daldırın. Bu adım, suda çözünür boyalarla daha iyi uyumluluk için alkolü suyla değiştirerek dokuyu yeniden sulandırır.

Dokuyu, oksitlenmiş formda mordan - bir metal katyonu olan bazik hematoksilen ile boyayın. Bu kompleks, genomdaki nükleik asitlere elektrostatik olarak bağlanır ve çekirdeği mora boyar.

Sitoplazmadan fazla hematoksilini çıkarmak için lekeli bölümü asidik bir farklılaşma çözeltisine batırın, böylece boya tutucu çekirdeğin belirgin görünmesini sağlayın. Serbest asitleri nötralize etmek için dokuyu alkali bir mavileştirme maddesi ile tedavi edin. Bu, mor boya rengini maviye gerileterek nükleer detayları güçlendirir.

Sitoplazmadaki temel protein bileşenlerini ve bağ dokusu liflerini kırmızıdan pembeye kadar olan tonlarda boyamak için slaydı asidik eozin çözeltisine daldırın. Fazla eozini ortadan kaldırmak için dokuyu alkolle tedavi edin. Dokuyu kurutmak için artan konsantrasyonlarda etanol kullanın. Kalan reaktifleri temizlemek için slaytı ksilene batırın.

Görüntüleme üzerine, doku bölümündeki hücreler berrak mavi çekirdekler ve pembe sitoplazmik bölgeler gösterir.

Slaytları her seferinde 15 dakika boyunca iki kez% 100 ksilene batırarak deparafinize edin. Ardından, slaytları bir etanol gradyanı boyunca yeniden sulandırın. Her çözelti için, sıvı slaytlardan temiz bir şekilde akana kadar, daldırma başına iki saniye boyunca 8 ila 10 kez daldırın. Slaytları dört dakika boyunca %100 filtrelenmiş Harris hematoksilen içine yerleştirin.

Dört dakika sonra, bunları hızlı bir şekilde deiyonize su kabına geri aktarın. Deiyonize suyu, bölümlerden en uzaktaki kabın arka köşesine akıtın. Su artık mor olmayana kadar kabı periyodik olarak boşaltın.

Deveboynu ışıkları kullanarak hematoksilen yoğunluğunu diseksiyon mikroskobunda hızlı bir şekilde kontrol edin. Daha fazla boyama gerekiyorsa, slaytları bir dakika boyunca% 100 hematoksiline geri getirin.

İstenen hematoksilen boyaması elde edildikten sonra, slaytları iki kez% 0.05 hidroklorik aside batırın, ardından hemen temiz deiyonize su ile kaba geri aktarın. Kabı boşaltın ve iki kez suyla doldurun.

Slaytları her biri 30 saniye boyunca %95 etanol içeren iki kaba aktarın. Slaytları iki dakika boyunca eozin Y floksin-B çözeltisine yerleştirin.

İki dakika sonra, slaytları önceki% 95 etanol kabına geri aktarın, ardından diseksiyon mikroskobu altında rengin yoğunluğunu kontrol edin. Boyama yeterli değilse, 30 saniye boyunca eozin çözeltisine geri dönün. Gerektiği kadar tekrarlayın.

İstenilen yoğunlukta boyama elde edildiğinde, slaytları 15 saniye boyunca% 100 izopropanole aktarın. Taze %100 izopropanol ile değiştirin ve slaytları 15 saniye daha izopropanol içine geri yerleştirin. Bu işlemi toplam altı izopropanol yıkama için tekrarlayın.

Üç dakika boyunca %100 ksilene batırdıktan sonra, bir sürgüyü çıkarın, bölümleri kaplamak için yeterli montaj ortamı ekleyin ve ardından sürgüyü %100 ksilene batırın.

Slayta bir lamel uygulayın ve fazla montaj ortamını sadece ince bir çizgi görünene kadar bir kağıt havlu üzerinde kurulayın. Ardından, ksilenin içine bir mendil batırın ve damlayan herhangi bir ortamı çıkarmak için slaytın arkasını silin.

Sürgüyü bir karton parçası gibi sağlam ama hareketli bir yüzeye düz bir şekilde yerleştirin ve ksilenin davlumbazda 10 dakika buharlaşmasına izin verin. Görüntülemeden önce montaj ortamının sertleşmesini sağlamak için slaytları gece boyunca oda sıcaklığında bırakın.