JoVE Encyclopedia of Experiments
Biyolojik Teknikler
0 görüntüleme • 2:27 dk • July 8th, 2025
Kıkırdak boyama için, ötenazi yapılmış bir fareden formalinle sabitlenmiş, parafine gömülü bir kıkırdak bölümü ile başlayın.
İlk olarak, numuneyi ksilen ikamesine daldırın - parafin mumunu uzaklaştıran ve susuz kalmış dokuyu açığa çıkaran tehlikeli olmayan bir temizleme maddesi. Daha sonra, sonraki boyama için dokuyu yeniden sulandırmak için numuneyi azalan etanol konsantrasyonları ile muamele edin.
Şimdi, numuneyi Weigert'in demir hematoksilen (demir iyonları içeren organik bir leke) ile boyayın ve kısa bir süre inkübe edin. Hematoksilen molekülleri, demir iyonları ile kompleksler oluşturur ve hücreye nüfuz eder. Demir iyonları bir mordan görevi görür ve hematoksilinin nükleik asitlere bağlanmasını kolaylaştırarak onlara mavi bir renk verir.
Ardından, numuneyi hızlı yeşil boya ile muamele edin - bağ dokusuna bağlanan ve yeşil bir renk veren bir karşı leke. Daha sonra, boya moleküllerini stabilize etmek için numuneye bir asetik asit çözeltisi uygulayın. Son olarak, numuneyi katyonik bir boya olan safranin-turuncu ile boyayın ve inkübe edin.
Pozitif yüklü safranin molekülleri, kıkırdaktaki negatif yüklü proteoglikanlara doğru göç eder ve onlara bağlanarak kırmızı bir renk verir. Daha sonra, slaytı bir reçine ortamına monte edin ve mikroskop altında görselleştirin.
Sağlıklı kıkırdak, proteoglikan açısından zengin hücre dışı matris nedeniyle yoğun kırmızı görünürken, sağlıksız kıkırdak, doku hasarı belirtileri ile daha az kırmızı görünür.
Safranin-O boyamayı gerçekleştirmek için, önce slaytları oksilen içinde üç ila beş dakika deparafinize edin ve oksilen banyosunu iki kez tekrarlayın. Ardından, slaytları damıtılmış su ile biten bir etanol gradyanında nemlendirin. Ardından, slaytları Weigert'in Demir Hematoksilen çözeltisi, %0.05 Hızlı Yeşil çözelti, %1 asetik asit çözeltisi ve %0.1 Safranin-O çözeltisinden geçirin. Şimdi, slaytları reçineli bir ortam kullanarak monte edin.