Hücrelerin Periyodik Asit-Schiff Boyama: Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinde Glikojen Düzeylerini Tespit Etmek İçin İn Vitro Bir Teknik

Periferik kan mononükleer hücreleri veya PBMC'ler, B ve T lenfositleri, doğal öldürücü hücreler, monositler ve dendritik hücrelerden oluşan tek, büyük çekirdekli dolaşım kan hücreleridir. PBMC'ler, fazla glikozu sitoplazmalarında glikojen - dallı bir polisakkarit - olarak polimerik formda depolar.

PBMC'lerde glikojen varlığını tespit etmek için, bir cam slayt üzerinde izole edilmiş PBMC'lerin tek tip bir yaymasını hazırlayın. Hücreleri, hücresel biyomolekülleri çapraz bağlayan ve PBMC'lerin yapısal bütünlüğünü koruyan fiksatif bir çözelti olan formalin ile tedavi edin.

Slaytı kısmen amilaz çözeltisine daldırın. Bu enzim hücrelere girer ve tedavi edilen hücrelerde glikojeni hidrolize eder. Bu, iki farklı hücre popülasyonu ile sonuçlanır - enzimle tedavi edilmiş, glikojen eksikliği olan ve amilazla muamele edilmemiş, glikojen açısından zengin hücreler.

Bunları, glikojen moleküllerinin hidroksil gruplarını oksidatif olarak aldehitlere dönüştüren periyodik asit çözeltisi ile kaplayın.

Oksidasyon reaksiyonunu durdurmak ve fazla periyodik asidi gidermek için slaytı suda durulayın. Slaytı, periyodik asitle muamele edilmiş glikojenin aldehit gruplarıyla reaksiyona giren ve çözünmeyen macen