Tartarat Dirençli Asit Fosfataz Boyama: TRAP Enzimi İçeren Kültürlenmiş Osteoklastları Tespit Etmek İçin İn Vitro Bir Teknik

Osteoklastlar, kemik yüzeyinde bulunan büyük, kubbe şeklinde, çok çekirdekli hücrelerdir. Bu hücreler, tartarat dirençli asit fosfataz veya osteoklastların kıvrımlı sınırından kemik dokusuna salgılanan bir metaloprotein enzimi olan TRAP açısından zengin çok sayıda sitoplazmik granül içerir. Bu enzim hücre dışı matrisi sindirir ve mineral kristallerini çözerek kemik erimesini kolaylaştırır.

TRAP granüllerini osteoklastların sitokimyasal belirteçleri olarak tespit etmek için, yapışkan osteoklastlar içeren bir kültür kabı alın. Hücrelere TRAP boyama solüsyonu ekleyin. Bu çözelti, bir diazonyum tuzu ile desteklenmiş bir tampon içinde fosfat içeren bir naftol türevi ve tartarik asit olan substratı içerir.

TRAP boyama için gerekli asidik pH'ı korumak için bu çözeltiye asetik asit ekleyin. Optimum TRAP enzim aktivitesi için hücreleri karanlıkta fizyolojik sıcaklıkta inkübe edin.

Boyama çözeltisi, tartarik asidin diğer hücrelerdeki tartarat duyarlı asit fosfatazların hidrolize edici aktivitesini inhibe ettiği osteoklastlara girer.

Aynı zamanda TRAP, fosfat grubunu uzaklaştırmak için eklenen substratı hidrolize eder. Hidrolize substrat, kestane rengi çözünmeyen bir boya kompleksi oluşturmak