Alizarin Kırmızı Boyama: Kültürlenmiş Osteoblastlarla Mineralizasyonu Görselleştirme Tekniği

Osteoblastlar, hücre dışı matrisleri ECM'ye küçük veziküller salgılayan kemik oluşturan hücrelerdir. Matriks vezikülleri olarak adlandırılan bu veziküller, içinde mineral kristalleri oluşturan kalsiyum ve fosfat iyonu girişini sağlayan zar taşıyıcıları ve enzimlerle donatılmıştır. Kristaller biriktikçe, ECM'de mineralize nodüller oluşturmak için vezikül zarını kırarlar ve kemik mineral yoğunluğunu oluştururlar.

Mineralizasyonu görselleştirmek için, uygun bir büyüme ortamında biyouyumlu bir iskele üzerinde osteoblast hücreleri ile başlayın. Osteoblastlar iskeleye yapışır ve daha sonra ECM'de mineralize nodüller oluşturan matris veziküllerini salgılamak için ortamdan büyüme faktörlerini kullanır.

Kültür ortamını aspire edin ve herhangi bir ortam izini gidermek için hücreleri durulayın. Hücreleri, ECM'nin çapraz bağlanmasını, sabitlenmesini ve doku yapısının korunmasını indükleyen bir formalin çözeltisi ile tedavi edin. Kalan formalini çıkarmak için hücreleri yıkayın.

Daha sonra, Alizarin Kırmızı boyama solüsyonu ekleyin ve kültürü inkübe edin. Boya molekülleri mineralize nodüle bağlanır ve önemli bir kemik minerali olan kalsiyum ile birleşerek büyük lekeli kompleksler oluşturur.

Boya