JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 2:49 dk. • July 8th, 2025
Fibrozis, hasarlı dokunun hücre dışı matriksinde fibriller kollajen birikiminin artmasıdır. Yapısal olarak, üçlü sarmal kollajen polipeptit zincirlerinden oluşur.
Kollajeni picrosirius kırmızı boyası ile boyamak için paraformaldehitle sabitlenmiş, parafine gömülü bir kalp dokusu bölümü alın. Çevreleyen balmumu çözmek için doku bölümünü organik bir çözücü olan ksilene daldırın.
Deparafinize edilmiş dokuyu, ksilenin yerini almak için azalan alkol konsantrasyonları ile sırayla tedavi edin. Sonraki adımlarda daha iyi leke görselleştirmesi için dokuyu yeniden sulandırmak için suya batırın.
Dokuyu Sirius kırmızısı - anyonik bir azo boyası - ve pikrik asit içeren picrosirius kırmızı çözeltisine batırın.
Sirius kırmızısı, kollajende bulunan lizin, hidroksilisin ve arginin temel amino grupları ile etkileşime giren asidik sülfonik gruplar içerir. Pikrik asit, asidik pH'ın korunmasına yardımcı olur ve boya moleküllerinin kollajen ile paralel bir yönde bağlanmasını kolaylaştırır.
Fazla lekeyi çıkarmak için slaytları asitleştirilmiş bir leke giderme solüsyonunda durulayın. Slaytın üzerine bir damla montaj ortamı koyun ve parlak alan mikroskobu altında görüntüleyin.
Kollajen içeren fibrotik alan
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin