Lignini Görselleştirmek için Wiesner Boyama: Arabidopsis thaliana'nın Gövdelerinde Bulunan Lignin Birikintilerini Boyama Tekniği

Bitkilerde, karmaşık bir biyopolimer olan lignin, tipik olarak destek sağlamak için dokuların hücre duvarlarında biriktirilir.

Linifikasyon ağırlıklı olarak, damarlar ve lifler gibi su ileten ksilem hücrelerinin ikincil hücre duvarı kalınlaşmalarında ve interfasiküler lifler gibi ekstra ksiller hücrelerde bulunur.

Yapısal olarak lignin, çapraz bağlı monolignol öncülerinden oluşur. Bu aromatik alkoller polimerize olur ve oldukça dallı bir yapı oluşturur. Bu özellik bitkinin gücünü ve sertliğini arttırır.

Wiesner boyamayı kullanarak lignin birikimini görselleştirmek için, bitkinin orta veya alt kısmından elde edilen agaroza gömülü dikot sapı kesitlerini alın. Bunları uygun bir tampon içeren bir mikrosantrifüj tüpüne ekleyin.

Asitleştirilmiş phloroglucinol ve etanol içeren hazırlanan leke solüsyonunu gövde bölümlerine ekleyin. Lignininde bulunan alkoller, pembe bir pigment elde etmek için floroglusinol ve etanol ile reaksiyona girer. Bu, özelleşmiş hücrelerin hücre duvarlarında lignin birikimine karşılık gelen pembe renklenmenin gelişmesine neden olur.

Şimdi, lekeli bölümü mikroskobik bir lam üzerine aktarın. Daha iyi görselleştirmeye yardımcı olmak için kabarcıklardan kaçınarak bölümün üzerine nazikçe bir lamel yerleştirin. Kesitleri ışık mikroskobu altında görselleştirin.

Özel ksilem hücrelerindeki pembe renklenme ve gövde kesitlerindeki interfasiküler lifler, bu dokularda lignin varlığını doğrular.

Phloroglucinol boyama için, gövde bölümlerini bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Tüpe 1 mililitre phloroglucinol solüsyonu ekleyin ve hemen kapatın çünkü phloroglucinol boyasındaki hidroklorik asit oldukça aşındırıcıdır. Tüm bölümlerin lekeli olduğundan emin olmak için tüpü yavaşça hareket ettirin. Bölümleri nazikçe kesilmiş bir pipet ucuna ve bir mikroskop lamına pipetleyin. Bölümleri bir lamel ile örtün. Parlak alan aydınlatması altındaki bölümleri gözlemleyin. Çözelti 5 ila 10 dakika içinde kurur ve numunelerin bozulmasına neden olur, bu nedenle görüntülemenin bu süre içinde tamamlanması gerekir.