JoVE Encyclopedia of Experiments
Biyolojik Teknikler
0 görüntüleme • 2:37 dk • July 8th, 2025
Bitki hücrelerinde, özel bir koruyucu tabaka olan hücre duvarı, plazma zarını çevreler. Hücre duvarı ağırlıklı olarak, β-1, 4 glikozidik bağlarla uçtan uca bağlanmış glikoz monomerlerinin doğrusal, dallanmamış bir polisakkariti olan selülozdan oluşur.
Selüloz, bir hemiselüloz, pektin ve protein matrisine gömülü, ortogonal olarak düzenlenmiş selüloz mikrofibrilleri şeklinde toplanmış bir halde bulunur.
Vasküler ksilem dokusu ve interfasiküler lifler gibi bazı hücreler, hücre duvarlarında sertleştirici bir ajan olan lignin de içerir.
Bitki hücre duvarlarında selüloz birikimini görselleştirmek için, tamponda bir dikot bitki sapının agaroza gömülü enine kesitleri ile başlayın. Sulu bir kemifloresan, düzlemsel boya olan calcofluor white çözeltisi ekleyin. Boyanın dokuya yayılmasına izin vermek için inkübe edin.
İçeri girdikten sonra, kalkoflor beyazı, hidroksil fonksiyonel grupları aracılığıyla, selülozdaki glikoz monomerlerinin hidroksil grupları ile etkileşime girer ve hidrojen bağları oluşturur. Bu, boyayı selüloza yaklaştırır ve ek van der Waals etkileşimlerini destekleyerek stabil boya-selüloz kompleksine yol açar.
Gövde kısımlarını bir cam kızak üzerine aktarın ve bir lamel monte edin. Ultraviyole ışık aydınlatması altında, selüloza bağlı boya molekülleri parlak beyaz renkte floresan renk verir.
Epidermis, korteks ve öz hücreleri, yüksek selüloz içeriği nedeniyle açıkça ayrılmış hücre duvarı ana hatları ile yoğun floresan sergiler. Karşılaştırıldığında, ksilem ve interfasiküler liflerin hücreleri loş bir şekilde floresan olur, bu da muhtemelen lignin varlığına bağlı olarak yetersiz boya difüzyonunu düşündürür.
Kalkoflor beyazı boyama için, gövde bölümlerini bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın ve %0.02'lik kalkoflor beyazı çözeltisinden bir mililitre ekleyin. Solüsyonu nazikçe yukarı ve aşağı pipetleyin. İnkübe etmeye devam edin ve bölümleri UV ışığı altında gözlemlemeden önce metin protokolünde ayrıntılı olarak belirtildiği gibi yıkayın.