JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 2:59 dk. • July 8th, 2025
Diyalize edilmiş bir bakteriyel protein lizatından ilgilenilen bir proteinin anyon değişim kromatografisi ile ayrılması için, lizat viskozitesini azaltmak ve kromatografik kolonu tıkamasını önlemek için bir bağlayıcı tampon ekleyin.
Tampondaki şelatlama maddeleri, iki değerlikli katyonları bağlayarak proteaz aktivitesini inhibe eder ve protein bozulmasını önler. Ek olarak, hedef proteinin izoelektrik noktasının, pI'nin, proteinin net yükünün olmadığı pH'ın üzerinde olan tampon, aşırı negatif yüklü hidroksil iyonlarının proteinin pozitif yüklü amin gruplarını nötralize etmesine neden olarak proteinin yüzeyini negatif yüklü hale getirir.
Pozitif yüklü kuaterner amin grupları ile çapraz bağlı, agaroz bazlı sabit faz içeren anyon değişim kromatografisi kolonunu birleştirin. Numune yüklemesi sırasında sütunu maksimum protein etkileşimine hazırlamak için bağlayıcı tamponu ekleyin. Seyreltilmiş bakteri lizatını yükleyin.
Negatif yüklü hedef proteinler, kolondaki pozitif yüklü gruplara daha az negatif yüklü proteinlere göre daha sıkı bağlanır.
Bağlanmamış pozitif yüklü proteinleri kolondan çıkarmak için bağlayıcı tamponu çalıştırın. Kolondan bir elüsyon tamponu geçirin ve tuz konsantrasyon
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin