JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:22 dk. • July 8th, 2025
Kalsiyuma bağımlı hidrofobik etkileşim kromatografisi, bir numunedeki kalsiyum bağlayıcı proteinleri diğer kalsiyum bağlayıcı olmayan proteinlerden ayırmak için kullanılan bir tekniktir.
Başlamak için, hedef proteinlerle etkileşimleri kolaylaştırmak için hidrofobik fenil grupları ile türetilmiş çapraz bağlı agaroz boncuklarından oluşan bir matris içeren önceden monte edilmiş bir kromatografi sütunu alın. Sonraki numune yüklemesi sırasında maksimum reçine ve hedef protein etkileşimi için çok yüksek konsantrasyonda kalsiyum iyonları içeren bir bağlayıcı tampon ile dengeleyin.
Diyaliz protein karışımını içeren bir numune alın ve kolon dengelemesi için bağlayıcı tamponda kullanılana eşit konsantrasyonda kalsiyum klorür ile takviye edin. Bu, proteinin kolona bağlanmasını en üst düzeye çıkarır.
Kalsiyum iyonları, lizattaki spesifik proteinlere bağlanarak, bu protein moleküllerinde hidrofobik bölgelerini açığa çıkaran konformasyonel bir değişikliğe neden olur.
Sütunu tıkamalarını önlemek için safsızlıkları ve agregaları ayırmak için karışımı filtreleyin. Bu filtratı önceden dengelenmiş sütuna yükleyin. Açıkta kalan hidrofobik bölgelere sahip proteinler, reçinenin karşılık gelen hidrofobik
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin