Heparin Afinite Kromatografisi Tabanlı Bakulovirüs Saflaştırması: Bakulovirüsü Böcek Hücresi Süpernatantından İzole Etmek İçin Bir Teknik

Bakulovirüsler - çift sarmallı DNA virüsleri - GP64 gibi ana viral glikoproteinleri içeren bir zarfla çevrilidir.

Bakulovirüsleri, hücresel kalıntı ve kontamine edici proteinler içeren bir hücre kültürü süpernatantından izole etmek için, çapraz bağlı agaroz boncuklarından oluşan bir matris içeren bir heparin afinite kromatografi kolonunu birleştirin. Bu boncuklar, heparin zincirine negatif bir yük veren sülfat gruplarına sahip doğrusal bir polisakkarit olan heparine bağlanır.

Süpernatan yüklemesi sırasında maksimum bakulovirüs ve heparin etkileşimleri için uygun koşulları sağlamak üzere sütunu nötr pH'a ve optimum iyonik kuvvete sahip bir yıkama tamponu ile dengeleyin. Bakulovirüs içeren süpernatanı kolona yükleyin.

Bakulovirüs GP64'teki bazik amino asitler, negatif yüklü heparin ile spesifik olmayan elektrostatik etkileşimleri kolaylaştırır ve gevşek bir şekilde bağlanan kirleticilerin aksine kolona sıkıca bağlanır. Sütunu bir yıkama tamponu ile durulayın, bağlanmamış ve gevşek bağlı kirletici proteinleri ve kalıntıları temizleyin.

Yıkama tamponundan daha yüksek iyonik kuvvete sahip bir elüsyon tamponunu kolondan geçirin. Daha yüksek iyonik kuvvet, bakulovirüs-heparin elektrostati