Katyon Değişim Kromatografisi: Net Yüzey Yüküne Dayalı Olarak Böcek Hücresi Lizatından Hedef Rekombinant Proteini İzole Etme Tekniği

Katyon değişim kromatografisi, net yüzey yüklerine bağlı olarak karışımlardan protein ayrılmasını kolaylaştırır.

Böcek hücresi protein lizatından hedef sinyal dönüştürücü protein izolasyonu için, diğer kirletici proteinleri içeren diyalize edilmiş bir hedef protein lizatı elde edin. Lizat viskozitesini azaltmak ve protein çözünürlüğünü artırmak için sodyum klorür içeren tampon ekleyin, bu da çalışma sırasında kromatografik kolon tıkanmasını önlemeye yardımcı olur.

Ek olarak, proteinin sıfır net yüke sahip olduğu hedef proteinin izoelektrik noktası olan pI'nin altındaki tampon pH, fazla hidrojen iyonlarının negatif karboksilat gruplarına bağlanmasını kolaylaştırarak hedef proteini pozitif yüklü hale getirir.

Negatif yüklü gruplara bağlanmış çapraz bağlı agaroz boncukları içeren kromatografik sütunu birleştirin. Sütunu dengelemek ve sütun-protein etkileşimlerini en üst düzeye çıkarmak için bağlayıcı tampon ekleyin. Seyreltilmiş lizatı dengelenmiş kolona yükleyin.

Daha pozitif yüklü hedef proteinler, daha az pozitif yüklü kirletici proteinlere göre kolonun negatif yüklü gruplarına etkileşime girer ve sıkıca bağlanır.

Bağlanmamış negatif yüklü kirletici proteinleri çıkarmak için sütunu