JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:51 dk. • July 8th, 2025
Uygun kültür koşulları altında, gram negatif bakteriler, kargo taşıyan dış zar veziküllerini veya OMV'leri süpernatana salar. Bu veziküller, hücresel iletişime aracılık eden heterojen büyüklükte, küçük, küresel yapılardır.
OMV'lerin farklı büyüklükteki alt popülasyonlarını parçalamak için, matrisi desteklemek için tabanında uygun bir filtre bulunan boş bir boyut dışlama kromatografi sütunu alın.
Kolu, tanımlanmış gözenek boyutuna sahip kimyasal olarak inert, küresel boncuklardan oluşan jel filtrasyon matrisi ile paketleyin ve boyutun büyük boyutlu OMV'lerin girmesini önlemek için en uygun olduğundan emin olun. Optimum saflaştırma için boncukların kurumasını önlemek için sütunu uygun bir tamponla dengeleyin.
Farklı boyutlarda OMV'lerin, protein agregatlarının ve nükleik asitlerin alt popülasyonlarını içeren bakteri kültürü süpernatantını kolonun üstüne yükleyin. Numunelerin yerçekimi kuvveti ile çalışmasına izin verin.
Numuneler kolondan geçerken, gözeneklere giremeyen daha büyük OMV'ler, önce ayrıştırılmak için jel boncuklar arasındaki parçacıklar arası boşluklardan geçer. Bu arada, daha küçük OMV'ler matris gözeneklerine nüfuz eder, daha uzun bir yol izler ve daha sonra elüte olur
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin