JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:05 dk. • July 8th, 2025
Lipid çift katmanlı membranlara tutturulmuş bakteriyel integral membran proteinleri, moleküllerin membranlar boyunca taşınmasını ve sinyallerin iletilmesini kolaylaştırır. Yapısal çalışmalar için, spesifik integral membran rekombinant proteinleri, kaynaşmış yeşil floresan proteini, GFP ile aşırı eksprese edilir.
Deterjan çözündürmesini takiben rekombinant membran protein stabilitesini değerlendirmek için, GFP etiketli integral membran proteinleri içeren bakteri membran fraksiyonu elde edin. İyonik olmayan bir deterjan ekleyin. Kritik konsantrasyonun ötesinde, deterjan miseller oluşturur.
Miseller, lipid zarları ve zar proteinleri ile etkileşime girerek zarları çözündürür ve protein-deterjan kompleksleri oluşturur. Ek olarak, zar proteinlerinin hidrofobik transmembran bölgeleri maskelenmeden kalabilir ve bu da protein agregasyonuna neden olabilir. Ayrıca, zar proteinlerinin bozunması nedeniyle serbest GFP'ler ortaya çıkabilir.
Karışımı santrifüjleyin. Deterjanla çözünen fraksiyon içeren süpernatanı toplayın.
Bir floresan dedektörüne bağlı bir boyut dışlama kromatografi sütunu monte edin. Kolon matrisi, geniş bir fraksiyonlama aralığını tanımlayan gözenek boyutlarına sahip agaroz bon
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin