Floresan Algılama Boyut Dışlama Kromatografisi: Deterjan Çözündürmesi Üzerine Floresan Membran Proteinlerinin Bütünlüğünü Belirleme Tekniği

0 views • 3:05 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Lipid çift katmanlı membranlara tutturulmuş bakteriyel integral membran proteinleri, moleküllerin membranlar boyunca taşınmasını ve sinyallerin iletilmesini kolaylaştırır. Yapısal çalışmalar için, spesifik integral membran rekombinant proteinleri, kaynaşmış yeşil floresan proteini, GFP ile aşırı eksprese edilir.

Deterjan çözündürmesini takiben rekombinant membran protein stabilitesini değerlendirmek için, GFP etiketli integral membran proteinleri içeren bakteri membran fraksiyonu elde edin. İyonik olmayan bir deterjan ekleyin. Kritik konsantrasyonun ötesinde, deterjan miseller oluşturur.

Miseller, lipid zarları ve zar proteinleri ile etkileşime girerek zarları çözündürür ve protein-deterjan kompleksleri oluşturur. Ek olarak, zar proteinlerinin hidrofobik transmembran bölgeleri maskelenmeden kalabilir ve bu da protein agregasyonuna neden olabilir. Ayrıca, zar proteinlerinin bozunması nedeniyle serbest GFP'ler ortaya çıkabilir.

Karışımı santrifüjleyin. Deterjanla çözünen fraksiyon içeren süpernatanı toplayın.

Bir floresan dedektörüne bağlı bir boyut dışlama kromatografi sütunu monte edin. Kolon matrisi, geniş bir fraksiyonlama aralığını tanımlayan gözenek boyutlarına sahip agaroz boncuklardan oluşur.

Spesifik olmayan etkileşimleri en aza indirmek ve protein çözünmesini sürdürmek için sütunu deterjan içeren tamponla dengeleyin.

Çözündürülmüş membran fraksiyonunu kolona yükleyin. Protein agregaları en büyük gözeneklerden kaçar ve boncuklar arasındaki parçacıklar arası boşluklardan geçerek önce dışarı çıkar. Daha küçük protein-deterjan kompleksleri boncuklarda birkaç gözeneğe girer, daha uzun bir yoldan geçer ve daha sonra elüte olur. Serbest GFP'ler tüm boncuk gözeneklerine girer ve en son elüte olur. Floresan dedektörü, GFP tarafından yayılan floresansı tespit ederek ayrıştırılmış fraksiyonları analiz eder.

Minimum agregalar ve serbest GFP içeren protein-deterjan komplekslerinin simetrik floresan tepe noktaları, deterjanın membran proteini çözünmesi için uygunluğunu gösterir.

Floresan ile tespit edilen boyut dışlama kromatografisi veya FSEC analizi için, daha sonra, dakikada 0,3 mililitre hızında çalışan akış tamponu ile geniş bir fraksiyonlama aralığına sahip bir boyut dışlama sütununu dengeleyin. Ardından, 100 mikrolitre çözünmüş membran numunesini aynı akış hızında kolona enjekte edin ve floresan optikler kullanarak illüzyon profilini izleyin.

08:12

İfade ve arıtma memeli Bestrophin iyon kanalları

Related Videos

0 Views

10:00

Boyutlar-dışlama kromatografi ile çok açılı ışık saçılmasına bağlı proteinlerin karakterizasyonu (SEC-,)

Related Videos

0 Views

07:26

Bakteriyel Dış Zar Vezikül Heterojenliğini Analiz Etmek için Boyut Dışlama Kromatografisi

Related Videos

0 Views

14:16

Mikroakışkan damlacık platformları için Floresan algılama yöntemleri

Related Videos

0 Views

04:48

Protein Homo-Oligomerizasyonunu İncelemek için Floresan Dalgalanma Spektroskopisi

Related Videos

0 Views

08:46

Membran proteinlerinin Yeşil floresan proteini temelli Ekspresyon elemesinde Escherichia coli

Related Videos

0 Views

11:55

Membran Transport Tek Protein çözünürlükte Oldukça Paralel nanopore çip Sistemi Analiz Süreçleri

Related Videos

0 Views

10:09

Membran proteinlerinin Hofstede deterjan duyarlı tespiti

Related Videos

0 Views

07:33

Hücre Delici Peptit ile Membran Dengesizleşmesini Araştırmak için Floresan Sızıntı Tahlil

Related Videos

0 Views

14:04

Floresan Korelasyon Spektroskopisi Kullanılarak Protein Toplamanın Tespiti

Related Videos

0 Views

Last updated: 11 July 2026