DFE Tabanlı Afinite Kromatografisi: Yüksek İyonik Kuvvete Dayalı Elüsyon Koşulları Kullanılarak Ham Bir Numuneden 2F5 Monoklonal Antikorların Saflaştırılması İçin Bir Teknik

DFE veya DsRed-2F5-Epitop, bir floresan proteini olan DsRed ve HIV-1 zarf glikoprotein antijeninin bir segmenti olan 2F5 epitopunu içeren rekombinant bir füzyon proteinidir. Bu epitop, 2F5 monoklonal antikoru üzerindeki tamamlayıcılık belirleyici bölgede bir bölge olan paratopu için yüksek bir afiniteye sahiptir.

Ham bir numuneden 2F5 monoklonal antikorları saflaştırmak için, yüzeylerinde hareketsizleştirilmiş DFE afinite ligandları içeren gözenekli reçine boncuklarıyla dolu bir sütun alın. pH'ı korumak ve sonraki adımlarda numune bileşenleri ile reçine arasındaki spesifik olmayan etkileşimleri önlemek için sütunu uygun bir dengeleme tamponu ile durulayın.

Hedef 2F5 monoklonal antikorlarını içeren numuneyi kolona yükleyin. Yavaş yavaş, numunedeki antikorlar kolondan veya sabit fazdan akmaya başlar.

Akış sırasında, antikorlar, sabit faz üzerinde hareketsiz hale getirilen DFE afinite ligandları ile geri dönüşümlü olarak etkileşime girer. Bu etkileşimlerde, 2F5 antikoru üzerindeki paratop, spesifik olarak DFE ligandı üzerindeki tamamlayıcı epitopuna bağlanır.

İstenmeyen numuneyi çıkarmak için kolonu bir dengeleme tamponu ile yıkayın.ampözellikle kolona özel olmayan bir şekilde bağlı.