Protein Analizi için Sodyum Dodesil Sülfat Poliakrilamid Jel Elektroforezi: Moleküler Ağırlığa Göre Proteinleri Ayırmak ve Görselleştirmek İçin Bir Teknik

Protein örneğini bir deterjan - sodyum dodesil sülfat, SDS ve bir indirgeyici ajan - beta-merkaptoetanol içeren bir denatüre edici tampon ile muamele ederek başlayın. Kısa bir süre ısıtın. Bu adım sırasında, beta-merkaptoetanol disülfid bağlarını bozarak proteine katlanmamış bir konformasyon sağlar.

Katlanmamış proteinler, maruz kalan hidrofobik amino asitleri ile negatif yüklü SDS'ye bağlanır ve düzgün bir negatif yük kazanır. Gerçek zamanlı görselleştirme için örneğe uygun bir izleme boyası ekleyin.

Şimdi, numuneyi ve standart moleküler boyut işaretleyicisini, daha düşük konsantrasyonda çapraz bağlı akrilamid polimerleri içeren poliakrilamid jelin üst tabakası olan istifleme jelinde bulunan ayrı kuyucuklara yükleyin.

Tampon dolgulu jel aparatını güç kaynağına bağlayın.

Bir elektrik alanının varlığında, negatif yüklü proteinler anoda doğru serbestçe hareket eder ve daha yüksek konsantrasyonlu bir jel içeren alt katman olan çözünen jele girmek için bir araya gelir.

Çözünen jelde, proteinler moleküler boyutlarına göre göç etmeye başlar, daha küçük proteinler hızla göç eder ve bu da optimal şekilde çözülmüş protein bantları ile sonuçlanır. Daha sonra, çalışmayı durdurun ve jeli çıkar