Mavi Doğal Poliakrilamid Jel Elektroforezi: Bozulmamış Mitokondriyal Solunum Zinciri Komplekslerinin Analizi için Denatüre Olmayan Bir Ayırma Tekniği

Solunum zincirinin beş mitokondriyal kompleksini bozulmamış alt birimlerle analiz etmek için, hafif, iyonik olmayan deterjan içinde çözündürülmüş mitokondriyal kompleksler elde edin. Anyonik bir boya olan Coomassie Blue-G içeren tampon ile karıştırın.

Coomassie deterjanın yerini alır ve komplekslere spesifik olmayan bir şekilde bağlanır, negatif yük verir ve onları maviye boyar. Ek olarak, Coomassie komplekslerin toplanmasını önler ve doğal yapılarını ve işlevlerini korumaya yardımcı olur.

Bir elektroforez tankında, büyük gözenek boyutunda istifleme jeli ile kaplanmış, uzunluk boyunca azalan gözenek boyutuna sahip gradyan çözme jeli içeren bir jel kaseti monte edin. Anot ve katot odalarını soğutulmuş anot ve Coomassie içeren katot tamponu ile doldurun.

Kuyucukları Coomassie bağlı protein kompleksi karışımı ile yükleyin. Elektroforezi başlatın.

Negatif yüklü protein kompleksleri, istifleme jelinden gradyan çözünen jele, pozitif yüklü anoda doğru göç eder. Daha küçük kompleksler gözeneklerden hızla geçerken, daha büyük kompleksler, çözünen jelden aşağı doğru hareket ettikçe kısıtlayıcı gözenek boyutları tarafından yavaşlatılır.

Çalışma sırasında komplekslerden ayrışan Coomassie, kato