Doğal protein komplekslerini ayırmak için Multimer-PAGE: bozulmamış multimerik proteinleri doku lizatından ayırmak için Blue Native-PAGE ve SDS-PAGE'den oluşan hibrit bir ayırma tekniği

Multimerik protein kompleksleri, çeşitli biyolojik süreçler için gereklidir.

Protein komplekslerini doğal hallerinde multimer-PAGE ile ayırmak için, istenen kompleksleri içeren doku lizatını alın. Lizatı Blue native PAGE için bir jel düzeneğine yükleyin.

Sistemi mavi anyonik boya içeren alkali bir çalışma tamponu ile doldurun ve güç kaynağına bağlayın. Alkali bir pH'ta, boya molekülleri protein kompleksine bağlanır ve ona denatüre etmeden genel bir negatif yük verir. Bu negatif yüklü, bozulmamış protein kompleksi, jelden mavi bir bant olarak geçer.

Minimal bir çalışmanın ardından ve bozulmamış proteinin çözünen jele geçmesine izin vererek, kompleksi içeren şeridi çıkarın. Şeridi, reaktif gruplarının proksimal proteinin amin grupları ile etkileşime girmesine izin vermek için çapraz bağlama maddesi içeren bir çözelti içinde inkübe edin ve multimerik kompleksi stabilize edin.

Reaksiyona girmemiş çapraz bağlayıcıların aktivitesini azaltmak için çapraz bağlama çözeltisini bir su verme reaktifi ile değiştirin. Doğal boyutlarını ve yapılarını korurken bozulmamış protein kompleksine düzgün bir negatif yük veren anyonik bir deterjan olan SDS'yi ekleyin.

İşlem görmüş şeridi yeni bir kasete y