JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:29 dk. • July 8th, 2025
Kılcal elektroforez kullanarak DNA fragmanlarının boyutunu belirlemek için, çok kuyulu bir tahlil plakası alarak başlayın. Her kuyucuk, floresan etiketli, farklı boyutlarda PCR amplikonları içerir - bir PCR döngüsünden sonra elde edilen çift sarmallı DNA oligonükleotidleri.
Kuyuya birkaç farklı boyutta, çift sarmallı DNA parçası ekleyin, bu da bir boyut standardı olarak işlev görür. Bu DNA moleküllerinin her biri, kolay tanımlama için floresan etiketi taşır.
Kuyucuğu güçlü bir denatüran olan formamid ile destekleyin ve yüksek sıcaklıkta ısıtın. Bu adım, DNA'yı denatüre eder ve jel gözeneklerinden kolayca geçebilen tek sarmallı parçalar oluşturur.
Plakayı, kılcal sisteminin içinde önceden enjekte edilmiş polimer jel içeren bir parça analiz ünitesine yerleştirin.
DNA'yı kuyudan katottaki ince çaplı kılcal damara - negatif terminale - elektrokinetik olarak sokmak için yüksek bir voltaj uygulayın. Negatif yüklü DNA molekülleri, pozitif yüklü anoda doğru göç eder. Daha kısa DNA zincirleri daha az sürtünme kuvveti ile karşı karşıya kalır ve jel boyunca daha uzun DNA ipliklerinden daha hızlı hareket eder.
Elektromigrasyon sırasında DNA, lazer ışınının yolunu geçer ve bu da boyanın floresa
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin