İndirgeyici Olmayan SDS PAGE: Disülfide Bağlı Multimerik Protein Komplekslerini Analiz Etmek İçin Bir Yöntem

Multimerik proteinler, yapısal ve fonksiyonel bütünlüklerinin korunmasında çok önemli olan sistein kalıntıları arasındaki moleküller arası, kovalent, disülfür bağları ile stabilize edilir.

Bu tür kompleksleri indirgeyici olmayan PAGE ile analiz etmek için, istenen disülfid stabilize protein konsantrasyonunu alın. İndirgeyici olmayan bir numune tamponu ekleyin ve numuneyi ısıtın.

Bu tampon, proteinlere genel bir negatif yük veren SDS ve jel içindeki hareketlerini görselleştirmek için bir izleme boyası içerir. Tampon, disülfid bağlarının bozulmadan kalmasına izin veren ve multimerik kompleksin bozulmadan kalmasını kolaylaştıran herhangi bir indirgeyici maddeden yoksundur.

Tek tek kompleksleri, bir jel aparatına önceden monte edilmiş, istenen yüzdedeki poliakrilamid jelin kuyularına yükleyin. Başka bir kuyucuğa bilinen boyutta bir protein merdiveni ekleyin. Kuyuları SDS tabanlı bir çalışma tamponuna daldırın ve cihazı bir güç kaynağına bağlayın.

Elektrik akımı, negatif yüklü protein komplekslerini jelin gözeneklerinden anoda doğru hareket etmeye zorlar - pozitif terminal. Protein kompleksleri düzgün bir şekilde negatif yüklü olduğundan, ayırma, multimerlerin belirli bir pozisyonda bel