Fare Daimi Orta Serebral Arter ligasyon Of Uygulama

Bu prosedürün genel amacı, hayvan modellerinde fokal serebral iskemiyi incelemektir. Bu işlem, öncelikle sol göz ile kulak tabanı arasındaki deriye küçük bir insizyon yapılarak gerçekleştirilir. Ardından, orta serebral arteri açığa çıkarmak için zigomatik ark ile skuam kemiğinin birleştiği noktada bir kraniyotomi uygulanır ve daha sonra orta serebral arter küçük bir damar koterizörü kullanılarak ligatörlenir.

Son olarak, yara kapatılmak üzere deri sütüre edilir. Nihayetinde, fare beyninin sol hemisferinde yer alan bir enfarktı gösteren sonuçlar elde edilebilir. İnme görselleştirmesi için beyin TTC ile boyanabilir veya MRI kullanılarak taranabilir.

İnme geçirmiş beyin, protein veya mRNA ekspresyonunun belirlenmesi için de kullanılabilir. Merhaba, ben Garza Chola. Rochester Üniversitesi'nde Gale Johnson'ın laboratuvarında lisansüstü öğrencisiyim.

Bu yöntem, iskemik beyindeki hücre ölümüne yol açan mekanizmaları örneklendirmek gibi, inme alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Cerrahiye hazırlanmak için tüm cerrahi aletleri, gazlı bezleri ve bilişsel aplikatörleri otoklav ile sterilize edin. Cerrahi aletleri ameliyat boyunca %70 ethanol içinde tutun ve kullanmadan hemen önce steril gazlı bez üzerinde hava ile kurutun.

Ameliyattan iki saat önce çalışma alanını %70 ethanol ile spreyleyin. Fareye kilogram başına 0.05 miligram buprenorphine enjekte edin. İlaç, ameliyattan hemen sonra tekrar uygulanacak ve ardından ameliyat sonrası ilk 24 saat boyunca her üç ila beş saatte bir verilmeye devam edilecektir.

Fareyi %3 izofluran ve %20 oksijen gaz karışımı ile anestezi altına almak için bir anestezik vaporizatör kullanın. Oksijen miktarını bir akış ölçer ile ayarlayın. Anestezi seviyesini ayak parmağını veya kuyruğu sıkarak test edin.

Anestezi seviyesini %2 izofloran ile koruyun. Farelerin gözlerine suni gözyaşı damlatın ve cerrahi işlem sırasında göze zarar vermemeye dikkat edin.

Hayvan tıraş makinesini kullanarak fareyi sağ yan tarafı üzerine, lateral pozisyonda yerleştirin. Sol göz ile sol kulak tabanı arasındaki sol taraf bölgesini tıraş edin. Pamuklu aplikatörler kullanarak, bölgeyi hafifçe ovarak sırasıyla Betadine solüsyonu ve %70 eth etanol ile temizleyin.

Tekrar gereklidir. Fareyi, rektal proba bağlı bir ısıtma pedinin üzerine yerleştirin. Vücut sıcaklığını 37 °C'de tutmak için rektal probu mineral yağı kullanarak yerleştirin. Fareyi mikroskop altında sağ yanına yatırın ve bantla sabitleyin.

Bir gazlı süngere pencere şeklinde bir kesik açın ve cerrahi alanı ince düz makasla kapatın. Sol göz ile sol kulağın tabanı arasında dikey bir insizyon yapın. Cerrahi sırasında dokuda aşırı kuruma meydana gelirse, cerrahi alanı açık tutmak için kavisli hemostatlar kullanın.

Steril PBS uygulamak için pamuk uçlu aplikatörler kullanın. Temporal kas üzerinde yatay bir insizyon yapmak için yaylı makas kullanın ve temporal kası kafatasından hafifçe ayırmak için pensetle yavaşça çekin. Çene kemiğini kavisli pensetle tutun ve zigomatik ark ile skuam sole kemiğinin birleşme noktasında küçük bir subtemporal kraniyotomi yapmak için 18 gauge bir iğne kullanın.

Kemik frezi ile jüriler kafatasından küçük parçalar çıkararak MCA'yı açığa çıkarırlar. Bu işlem sırasında zigomatik ark ve orbital içerikler zarar görmemelidir. Küçük bir damar koterizatörü kullanarak MCA'nın distal kısmını bağlayın, temporal kası orijinal konumuna geri yerleştirin ve beş sıfır naylon sütürler kullanın.

İnsizyon bölgesini kapatmak için anesteziyi kesin ve rektal probu çıkarın. Fareye deri altına ikinci doz buprenorfin enjekte edin. Fareyi, 37 °C'de tutulan kafese geri yerleştirin.

Isıtma paneli ile. Fareyi, iştah veya su tüketiminde azalma, kambur duruş, solunum artışı veya tüylerin dikleşmesi dahil olmak üzere herhangi bir rahatsızlık belirtisi açısından sonraki 24 saat boyunca yakından izleyin. Ameliyattan hemen sonra fareye iyileşme jeli sağlayın.

Ameliyattan sonra iki ila üç saat bekleyin. Ardından, 24 saate kadar her üç ila beş saatte bir fareye deri altına buprenorphine enjekte edin. Ameliyattan 24 saat sonra, fareyi derin anesteziye alın ve fareye 4%TTC ile perfüzyon uygulayın.

Beyni çıkarın ve gece boyunca %4'lük paraformaldehit çözeltisi içerisinde bekletin. Ertesi gün, beyni kesit alma bloğuna yerleştirin. Beyni bir milimetre kalınlığında dilimler halinde kesmek için jilet kullanın.

Kesitleri bir milimetre cetvelinin yanına yerleştirin. Bir diseksiyon mikroskobuna bağlı dijital kamera kullanarak, kesitlerin fotoğraflarını çekin ve Image J yazılımına aktarın.

Dosya menüsüne tıklayın ve istenen fotoğrafı açın. Programdaki düz çizgi sekmesine tıklayın. Cetvel üzerindeki iki kenar arasına düz bir çizgi çizin.

Analyze menüsüne tıklayın ve set scale seçeneğini belirleyin. Bilinen mesafeyi bir olarak ve uzunluk birimini milimetre olarak ayarlayın. Freehand circle sekmesine tıklayın.

Kontralateral hemisferi çevrelemek için bir daire çizin. Analiz menüsüne tıklayın ve ölçüm seçeneğini belirleyin. Çizilen dairenin alanını gösteren hesaplama penceresi açılacaktır.

Beyaz çizgi alanını hariç tutarak ipsilateral hemisferin etrafına başka bir daire çizin. Alanı daha önce gösterildiği gibi ölçün. Yeni değer hesaplama penceresine eklenecektir.

Birinci ve ikinci değerler arasındaki fark enfarkt alanını temsil eder. Bir milimetrelik kesit kalınlıkları için yukarıdaki adımları tekrarlayarak her kesitteki inme alanını hesaplayın. Her kesitte hesaplanan inme alanlarını toplayarak toplam inme hacmini hesaplayın.

Bu şekil, vahşi tip C 57 BL six faresinde kalıcı MCA ligasyonundan 24 saat sonra TTC boyaması uygulanmış beyni göstermektedir. İnme bölgesi beyaz görünümdedir ve farklı büyütmelerde ve açılardan görülebilmektedir. Burada, TTC ile boyanmış inme geçiren beynin anterior'dan posterior infarkta doğru bir milimetre kalınlığındaki kesitleri gösterilmektedir.

Hacim, cerrahiden 24 saat sonra hesaplanmıştır. İnfarkt hacmi yaklaşık olarak 23 kübik milimetredir. Bu teknik, uygun şekilde uygulandığında 30 dakika içinde tamamlanabilir.

İzlediğiniz için teşekkürler.