JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 7:37 dk. • July 8th, 2025
Homojenize tümör dokusundan türetilen protein karışımının iki boyutlu jel elektroforezi için, kaotroplar, zwitteriyonik deterjan ve indirgeyici ajan içeren tampon ile muamele edin. Kaotroplar ve deterjan proteinleri denatüre eder ve çözündürür. İndirgeyici ajanlar, proteinlerin disülfür bağlarını azaltır, serbest tiyol grupları oluşturur ve optimum protein çözünürlüğü için proteinleri açar.
İşlem görmüş protein karışımını hareketsizleştirilmiş bir pH gradyanı, IPG, şerit tutucuya aktarın. Akrilamid jel matrisi içine doğrusal pH gradyanı içeren bir IPG şeridi yerleştirin. Protein çözeltisinin buharlaşmasını önlemek için mineral yağ ekleyin. Tutucuyu bir izoelektrik odaklama, IEF sistemine aktarın. Protein çözeltisinin şeridi yeniden sulandırmasına izin verin.
Birinci boyut IEF'yi gerçekleştirin. Elektrik akımı, yüklü proteinlerin pH gradyanı boyunca zıt yüklü elektrotlara doğru göç etmesine ve ilgili izoelektrik noktalarında - proteinlerin sıfır net yüke sahip olduğu pH'ta - hareketsiz hale gelmesine neden olur.
IEF sonrası, IPG şeridini, proteinlere negatif yük veren anyonik bir deterjan olan sodyum dodesil sülfat, SDS ile muamele edin. Elektroforez sırasında protein çözünürlüğünü
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin