JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 6:59 dk. • July 8th, 2025
Propeptit ve katalitik alanları içeren çok alanlı bir proteaz olan matris metalloproteinaz veya MMP, belirli hücreler tarafından aktif olmayan bir enzim veya zimojen olarak salgılanır. Katalitik alan çinko iyonu ile propeptid alan sistein kalıntısı arasındaki etkileşim, MMP'yi inaktif tutar.
Enzimografi jel elektroforezi ile hücre kültürü süpernatantındaki MMP'leri tespit etmek için, jel kaseti içeren elektroforez tankını sodyum dodesil sülfat veya SDS içeren çalışma tamponu ile doldurun.
Yükleme tamponu ile karıştırılmış kültür süpernatanıntı, ardından protein standartlarını, MMP'ye özgü bir protein substratı ile kopolimerize edilmiş poliakrilamid jel kuyularına yükleyin.
Negatif yüklü bir deterjan olan SDS, indirgeyici olmayan koşullar altında, MMP'lerdeki sistein-çinko etkileşimlerini bozar ve negatif bir yük verirken proteinleri denatüre eder.
Elektroforez gerçekleştirin. Elektrik alanı, negatif yüklü proteinlerin pozitif yüklü anoda doğru göç etmesine neden olarak proteinlerin boyuta dayalı ayrılmasına neden olur.
Elektroforez sonrası, jeli iyonik olmayan deterjan içeren bir renatüre edici tampon ile işlemden geçirin. İyonik olmayan deterjanlar SDS'nin yerini alır, proteinleri
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin