İn Vitro Glikoz Tükenme Testi: Hücre Dışı Glikoz Tükenmesi Ölçümü Yoluyla Hücresel Glikoz Alımını Ölçmek İçin Floresan Tabanlı Bir Yöntem

Birincil hücresel enerji kaynağı olan glikoz, hücre zarı glikoz taşıyıcı proteinleri yoluyla hücrelere girer. Glikoz, hücre sitoplazmasında glikolitik yol yoluyla piruvata parçalanır ve hücresel metabolizma için adenozin trifosfat veya ATP yoluyla enerji üretir.

Hücre içi glikoz alımını ölçmek için, çok kuyucuklu bir plakada yapışık bir fibroblast kültürü ile başlayın. Ortamı glikoz içermeyen ortamla değiştirin ve inkübe edin. Hücreler, enerji üretmek için mevcut glikozu metabolize eder ve glikoz açlığı durumuna ulaşır.

Bir kuyucuk setindeki ortamı, insülin, bir glikoz alım uyarıcısı ve bir glikoz analoğu olan floresan deoksiglukoz içeren glikoz içermeyen ortamla değiştirin. Başka bir kuyucuk setini floresan deoksiglukoz içeren glikoz içermeyen ortamla tedavi edin.

İnkübasyon sırasında insülin, ek glikoz taşıyıcılarının plazma zarına translokasyonunu uyarır ve glikoz yokluğunda floresan deoksiglukoz alımının artmasını kolaylaştırır.

Deoksiglukoz fosforile edilir ve hücreler tarafından daha fazla metabolize edilmez. Aynı zamanda, floresan deoksiglukozun hücre dışı konsantrasyonu azalır.

İnkübasyon sonrası, kullanılmayan floresan deoksiglukoz içeren ortamı toplayın. Hücreleri bir liz